蛋白是生命活动的直接体现者,蛋白的分析检测对生命科学有着重要的意义。蛋白常用的分析方法有酶联免疫法、免疫沉淀、免疫电泳、气相色谱-质谱连用技术等,但这些生物检测法和色谱-质谱联用法均需对样品进行预处理,不能实现蛋白的快速分析,为此需要建立实时直接分析方法,本论文采用纸喷雾电离技术和纳升电喷雾电离技术分别建立相应的方法,对蛋白进行分析检测。主要完成了以下内容:(1)本论文发展了一种制备疏水性纸基质的新方法,并将制备的纸基质用于蛋白的快速质谱分析。纸喷雾电离技术(PSI)虽然具有操作简单、耗材低廉、分析速度快等优点,但是该方法受到纸基质表面羟基与目标化合物中极性官能团之间形成的氢键和范德华作用力的极大限制。系统考察了烘烤温度和PS微球涂覆量对浸渍纸的表面性能的影响。同时还将制备的PS浸渍纸作为纸喷雾电离源-质谱分析的基质用于复杂基质(如PBS、Tris缓冲液和全血样)中蛋白及肽类(如细胞色素C、溶菌酶、肌红蛋白、血管紧张素II和血红蛋白等)的分析检测,与未涂覆滤纸相比,PS浸渍纸将纸喷雾的分析灵敏度提高了12-1348倍。(2)金属离子对生命体具有重要作用,研究金属离子与蛋白间相互作用是生命科学的重要内容。本论文系统考察了金属粉末种类、粒径、金属溶液浓度等因素对金属离子与蛋白相互作用的影响。基于纳升电喷雾电离技术(Nano ESI)建立了一种原位分析金属离子与蛋白的分析方法,并将该方法应用于金属离子与蛋白间相互作用的研究。根据质荷比对金属离子与蛋白的配位数进行理论计算。最后,将建立的分析方法应用于其他蛋白及肽类(如细胞色素C、溶菌酶、血管紧张素等)与金属离子相互作用进行探究,经计算金属离子与蛋白的配位数介于1和2之间。金属离子辅助纳升电喷雾法,为蛋白的分析检测提供了新思路。