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背景:肠易激综合征(Irritable bowel syndrome,IBS)是一种常见的功能性胃肠疾病,临床症状主要表现为腹痛、腹胀或腹部不适伴随排便习惯或粪便性状的改变,腹部症状在排便后可部分或者完全缓解。根据大便性状可将IBS分为不同的亚型,而腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowelsyndrome,IBS-D)是其最常见的亚型。IBS作为一种功能性疾病,其诊断主要依据以症状学为主的罗马Ⅲ诊断标准,缺乏公认的客观诊断指标,目前对于IBS的诊断存在诊断率低的现状。IBS-D与轻型、隐匿性的溃疡性结肠炎在临床症状上存在着相似性。部分溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者在结肠炎痊愈后可发生IBS。两者不仅在临床症状上存在着相似,一系列研究证据表明,UC与IBS可能具有相似的的病理生理学机制。近年来对IBS和UC的研究已经深入到分子水平,研究发现在IBS-D及UC患者肠道黏膜中存在着microRNAs表达改变。同时我们研究小组利用芯片技术发现与正常人群相比,IBS和UC患者的结肠黏膜组织中存在多种microRNAs表达变化,而部分microRNAs表达变化存在一致性,提示microRNAs可能参与了IBS-D与UC两种疾病的病理过程。应用T-class分类方法对芯片结果分析后发现5种microRNAs:miR-132,miR-100,miR-125a,miR-25,miR-30a-3p联合可准确区分IBS-D、UC及正常人群,但芯片结果仍需要进一步的PCR对其进行验证。
目的:利用实时荧光定量PCR的方法对芯片筛选出的在IBS-D和UC中表达变化的6种miRNAs:miR-132,miR-100,miR-125a,miR-25,miR-30a-3p,miR-146a进行检测,以期发现与IBS-D密切相关的miRNAs,发现IBS-D特异的分子标记物,可能有助于理解IBS-D的发病机制或病理过程,从而为其诊断和治疗提供新的工具和靶标。通过以上6种miRNAs在两种疾病中表达水平的差异可能有助于探讨两种疾病的发病机制间的关联性。
材料和方法:分别收集10例符合IBS罗马Ⅲ诊断标准及UC诊断标准和10例健康对照的乙状结肠组织标本,利用基于SYBR Green的实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法进行miRNA的相对定量检测,以U6为内参,利用2-△△CT方法计算miRNA的相对表达量的变化。通过SPSS15.0统计学软件进行统计学分析。
结果:miR-132在IBS-D患者乙状结肠粘膜内平均表达水平为正常对照组的0.23倍(P<0.01),其在UC组的表达水平为对照组的0.49倍(P<0.05);miR-146a在IBS-D组的平均表达水平为正常对照组0.2倍(P<0.05),其在UC组的表达水平为对照组的0.27倍(P<0.05);miR-125a在IBS-D组的平均表达水平为正常对照组0.06倍(P<0.001),其在UC组的表达水平为对照组的0.29倍(P<0.001);miR-100在IBS-D组的平均表达水平为正常对照组0.16倍(P<0.001),其在UC组的表达水平为对照组的0.29倍(P<0.05);miR-30a-3p在IBS-D组的平均表达水平为正常对照组0.44倍(P>0.05),其在UC组的表达水平为对照组的0.28倍(P<0.05);miR-25在IBS-D和UC组的表达水平分别为正常对照组的0.51倍和0.46倍,但无统计学意义(P>0.05)。6种miRNAs:miR-132,miR-146a,miR-125a,miR-100,miR-25,miR-30a-3p在IBS-D和UC组表达水平变化均无统计学差异(P>0.05)。
结论:IBS-D结肠粘膜内存在多种miRNAs表达异常,其中与免疫炎症相关的miR-132、miR-146a和miR-125a表达显著下调,提示免疫和炎症等因素可能参与了IBS-D的发生发展。而某些miRNAs在IBS-D和UC结肠组织表达变化存在相似性提示两种疾病可能存在一定的关联性。