异常黏液质成熟剂、清除剂的制备及其生物活性研究

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维吾尔医学2500多年以来,久存、发展、完善,是因为其具有理论体系即维吾尔医学理论体系。有史以来,维吾尔医学理论对维吾尔医学的发展起了关键的指导作用。目前维吾尔医药事业的发展在国内和我区迈入了一个新的历史性发展时期。今日,维吾尔医药事业的发展是维吾尔医学的迫切需求,深入研究和创新维吾尔医药理论是我们的使命。  维吾尔医学认为胆液质(Sapra),血液质(Kan),黏液质(Balgam),黑胆质(Sawda)等四种体液(Hilit)的异常变化导致体内各种物质性病变。其中异常黏液质性病理产物,在血管周围和组织间沉着,产生淤阻,改变组织器官的气质,最终导致中风,老年痴呆症,糖尿病,白癜风,银屑病,单纯性肥胖症,风湿病等难治性疾病。异常黏液质性疾病的治疗原则是根据引起黏液质性疾病的体液分型,首先使用相应的成熟剂(Munziq)使异常黏液质成熟和堆积,然后使用相应的清除剂(Mushil)使成熟的异常黏液质排出体外,使气质(Mizaj)和库外提功能复原,体液平衡,为疾病的治疗奠定基础。本论文主要对异常黏液质成熟剂、清除剂制备工艺、质量标准、化学成分及体内外生物活性进行研究为其进一步的开发和利用提供科学依据。  1.成熟剂、清除剂制备工艺研究  本论文对成熟剂、清除剂合剂进行了制备工艺研究,以总黄酮、出膏率为指标,采用正交实验法研究了最佳提取工艺。实验结果表明,成熟剂按照传统玫瑰花浸泡提取,参数为加水量20倍,60℃浸泡6h。其余甘草等7味药材回流提取加水量14倍,浸泡时间为24h,与玫瑰花药渣合并,回流提取2次,每次1小时,过滤,合并浓缩,制成1000ml。  清除剂制备工艺为按照传统刺糖浸泡,加10倍水,60℃浸泡4小时;阿勃勒加10倍水,60℃浸泡4小时,滤过,备用;其它药材粉碎成粗粉,加14倍水,浸泡24h后,提取2次,每次1h,合并煎液,滤过,合并上述浸泡液,浓缩,制成1000ml。  成熟剂、清除剂合剂pH值控制在4.0-6.0的范围内,采用流通蒸汽灭菌法,100℃灭菌30min,成熟剂合剂的相对密度规定为不得低于1.01(20℃),清除剂合剂的相对密度规定为不得低于1.04(20℃)。成熟剂、清除剂加入防腐剂选用0.20%的山梨酸作为防腐剂。  2.成熟剂、清除剂化学成分HPLC/QTOF-MS/MS及逆流色谱技术分析  采用HPLC/QTOF-MS/MS技术,对成熟剂、清除剂的化学成分初步HPLC分析,根据负离子模式下获得各色谱峰质谱数据,参照文献,对照物质对主要色谱峰进行指认,共分析了成熟剂24个化合物,清除剂21个化合物,其主要化学成分是有机酸类、鞣质类、黄酮及其苷类化合物。  对成熟剂、清除剂样品的乙酸乙酯部位进行分离、纯化、鉴定研究,成熟剂乙酸乙酯萃取部位,经过HSCCC一步分离得到纯度比较高的3个化合物并鉴定化合物Ⅰ为没食子酸甲酯,化合物Ⅱ为5,7,4-三羟基6,8-二异戊烯基异黄酮,化合物Ⅲ为甘草酚;清除剂乙酸乙酯萃取部位,经过HSCCC一步分离得到纯度比较高的3个化合物并鉴定出其中的2个化合物分别为化合物Ⅳ为葫芦素E-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,化合物Ⅵ为2,5-二甲基-7-羟基色酮。  3.成熟剂、清除剂合剂质量标准的建立  对成熟剂、清除剂合剂进行了质量标准研究。一般检查结果均符合中华人民共和国药典(2010版)合剂项下有关要求。成熟剂对甘草、玫瑰花进行了薄层鉴别,运用HPLC法对没食子酸、鞣花酸、甘草酸铵等3个成分进行含量测定研究;清除剂对阿勃勒、甘草进行了薄层鉴别,采用HPLC法对没食子酸、鞣花酸、甘草酸铵等3个成分进行含量测定研究。  4.成熟剂、清除剂体内外生物活性研究  本文中成熟剂、清除剂及成熟剂醇沉样品进行体外PTP1B、α-葡萄糖苷酶和醛糖还原酶酶体系抑制剂的筛选和ABTS、DPPH自由基清除实验。结果表明这三种样品对PTP1B和α-葡萄糖苷酶有不同程度的抑制作用;而对醛糖还原酶无抑制作用。在清除自由基试验中虽然相对阳性对照维生素C的效果相差较大,但也有一定的清除作用。实验结果表明成熟剂、清除剂、成熟剂醇沉提取物可以作为预防和治疗糖尿病的潜在有效药物。  观察成熟剂、清除剂提取物对2型糖尿病大鼠糖、脂代谢的影响,初步探讨了其作用机制。造模成功后按照成熟剂、清除剂维吾尔医临床应用规则,首先灌胃低、中、高三个剂量组的成熟剂提取物4周。结果:与模型组相比,体重及脏器指数:成熟剂中、高剂量组体重升高,高剂量组肝指数降低。糖代谢作用,血糖的变化;成熟剂高剂量组大鼠空腹血糖降低。对血清胰岛素:成熟剂中、高剂量组降低血糖,成熟剂(低、中、高剂量)均降低血清胰岛素,并呈剂量规律性。对胰岛素敏感指数:成熟剂中、高剂量组胰岛素敏感指数升高,且呈剂量规律性。脂代谢作用的相关指标比较:成熟剂低剂量组TG、LDL-C降低,HDL-C升高,成熟剂中、高剂量组TG、TC、LDL-C降低,HDL-C升高,且有剂量规律性。  观察清除剂造模成功后按照维吾尔医临床应用规则首先灌胃成熟剂4周后停止成熟剂,开始灌胃清除剂10天,结果:与模型组相比,体重及脏器指数观察,清除剂组(低、中剂量)体重降低;清除剂高剂量组体重升高、肝指数降低,且有剂量规律性。糖代谢作用,血糖的变化观察,第5周,清除剂高剂量组降低血糖。对血清胰岛素观察,清除剂高剂量组降低血糖,清除剂组(低、中、高剂量)均降低血清胰岛素。对胰岛素敏感指数,清除剂高剂量组胰岛素敏感指数升高。脂代谢作用的相关指标比较,5周后清除剂低剂量组TG、LDL-C降低,HDL-C升高中、高剂量组TG、HDL-C降低,高剂量LDL-C升高。  病理结果:模型组比较,成熟剂高剂量组及阳性对照组病理变化程度有明显的减轻,范围变小的现象。
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