【摘 要】
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背景:肝损伤是急性肝功能衰竭的基础,严重或持续的肝损伤最终导致肝功能衰竭。引起肝急性损伤的原因很多,主要有病毒感染、用药不当、食物添加剂、放射性损伤及接触、食入有
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背景:肝损伤是急性肝功能衰竭的基础,严重或持续的肝损伤最终导致肝功能衰竭。引起肝急性损伤的原因很多,主要有病毒感染、用药不当、食物添加剂、放射性损伤及接触、食入有毒食物、乙醇摄入过多等。由刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)诱导的小鼠急性肝损伤模型主要是由T淋巴细胞和巨噬细胞等介导得得免疫性肝损伤,能很好的模拟人类病毒性肝炎、自身免疫性肝病等肝脏疾病。小白菊内酯(Parthenolide,PN)是天然植物萜类化合物,具有抗炎、抗分泌、解痉药活性。目的:体内实验研究了小白菊内酯对ConA诱导的小鼠急性肝损伤模型的肝脾淤血肿大、肝脏组织中炎症细胞浸润、血清ALT和AST以及肝细胞增殖的影响。体外实验研究了小白菊内酯对巨噬细胞增殖和凋亡以及巨噬细胞TNF-α、IFN-γ等炎症因子基因的转录以及JNK、P38、STAT3、P53蛋白基因表达的影响。方法:体内实验:用小白菊内酯对小鼠进行腹腔注射3天做预处理,然后尾静脉注射ConA来构建小鼠急性肝损伤模型,模型构建后处死小鼠,检测小鼠肝脾淤血肿大情况。留取小鼠血清检测小鼠血清中ALT、AST的变化。用肝脏组织切片做HE染色、免疫荧光染色,观察小鼠肝脏中炎症细胞的浸润。分离脾脏单个核细胞做流式检测其TH1、TH2、巨噬细胞的变化。体外实验:用小白菊内酯和ConA共处理巨噬细胞RAW264.7,不同时间后分别提取细胞的蛋白和RNA来做Western Blot和实时定量PCR。同样处理72小时后,检测细胞凋亡。用CFSE处理RAW264.7后再种于六孔板中,再使用小白菊内酯和ConA处理,检测细胞增殖。结果:体内实验中,小白菊内酯缓解了ConA诱导的小鼠急性肝损伤模型中肝脏的淤血肿大;HE染色显示小白菊内酯减少了肝脏组织中炎症细胞的浸润;免疫荧光染色显示小白菊内酯减少了肝脏组织中巨噬细胞、T细胞、NK细胞的浸润;小白菊内酯改善了小鼠的肝功能:降低了小鼠血清中ALT、AST的升高,降低了小鼠的肝脾指数,使肝细胞的增殖有所增加;脾脏单个核细胞流式检测显示小白菊内酯对脾脏的TH1、TH2、TH17以及巨噬细胞没有明显影响。在体外实验中,小白菊内酯抑制了巨噬细胞RAW264.7的IFN-γ、TNF-α、STAT3等促炎因子基因的转录,并减少了巨噬细胞RAW264.7中炎症相关蛋白STAT3和P38基因的表达,促进了巨噬细胞RAW264.7的凋亡以及JNK和P53的磷酸化。结论:小白菊内酯对ConA诱导的小鼠急性肝损伤具有改善作用,降低了小鼠肝脏的淤血肿大,减少了肝脏组织中巨噬细胞、T淋巴细胞、NK细胞等炎症细胞的浸润,降低了血清中的ALT、AST的升高,促进了肝细胞的增殖。小白菊内酯抑制了TNF-α、IFN-γ等炎症因子基因的转录以及STAT3、P38蛋白基因的表达。促进了巨噬细胞的凋亡和蛋白JNK和P53的磷酸化。
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