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目的: 喉癌(laryngeal cancer)是耳鼻咽喉头颈外科常见的一种恶性肿瘤。近些年来喉癌的发病率较前显著增高,且年轻患者的比例呈现上升趋势。喉癌的发病机制复杂,涉及遗传、表观遗传和环境因素。DNA甲基化是目前为止最重要的一种表观遗传修饰。大量表观遗传学相关研究证明,抑癌基因启动子高甲基化会引起其表达抑制或沉默,从而参与各种肿瘤的发生和进展。作为潜在的抑癌基因,CLDN11基因已被证实在胃癌、恶性黑色素瘤中由于启动子高甲基化导致其表达下调,同时YPEL3基因在卵巢癌中也发现了这种改变。然而,CLDN11和YPEL3基因启动子甲基化水平与喉癌相关性的研究还未见报道。所以,此次研究主要检测CLDN11和YPEL3基因在喉癌中的甲基化水平,并分析CLDN11和YPEL3启动子甲基化水平与喉癌形成和进展的关系,评估CLDN11和YPEL3作为喉癌筛查中潜在分子标志物的可能性。 方法: 1.通过宁波市医疗中心李惠利医院伦理委员会同意,采集91例喉癌组织和相应的癌旁正常组织。 2.使用实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应(quantitative methylation-specific PCR,qMSP)分别检测91例喉癌患者癌组织及其配对的癌旁正常组织中CLDN11和YPEL3基因启动子甲基化水平,探讨CLDN11和YPEL3基因启动子甲基化水平与喉癌的关系。 3.配对样本t检验用于比较喉癌组织及其配对的癌旁组织之间CLDN11和YPEL3基因启动子甲基化水平。方差分析(ANOVA)用于评估CLDN11和YPEL3甲基化水平与各组临床病理特征之间的关系。通过构建受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC)评估CLDN11和YPEL3甲基化对喉癌的诊断价值。Kaplan-Meier分析用于评估CLDN11和YPEL3甲基化与患者总生存率的相关性。 结果: 1.qMSP结果显示喉癌组织中CLDN11和YPEL3基因启动子甲基化水平较癌旁正常组织明显升高(P<0.01)。 2.进一步研究CLDN11和YPEL3甲基化水平与喉癌患者临床病理特征的相关性,发现CLDN11基因启动子甲基化水平在淋巴结转移、临床晚期、高T分级患者中显著增高,而YPEL3基因启动子甲基化水平在男性、有吸烟史、低分化癌的患者中明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。 3.绘制ROC曲线,CLDN11和YPEL3的曲线下面积(AUC)分别为0.884(95%CI=0.835-0.932,P<0.01),0.697(95%CI=0.620–0.774,P<0.01)。 4.Kaplan-Meier分析发现,与低甲基化率的患者相比,CLDN11高甲基化的患者总生存率较差(对数秩检验,P=0.007)。 结论: CLDN11和YPEL3基因启动子在喉癌中呈现高甲基化状态,并且在喉癌的发生和进展过程中扮演重要角色,可能是喉癌筛查中潜在生物标志物。