基于代谢组学的当归补血作用研究

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 13次 | 上传用户:xiaohan191420
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本研究应用代谢组学方法分析了当归对乙酰苯肼(APH)与环磷酰胺(CTX)联合所致血虚小鼠血浆、脾脏、肝脏及尿液中代谢物变化情况,以期阐明当归补血作用机制。实验将昆明种小鼠随机分为空白组、血虚模型组和当归水煎液高、中、低剂量组(20g/kg、10g/kg、5g/kg),采集血液检测各组红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)的含量,测定胸腺、脾脏指数,采用气相色谱-质谱技术(GC-MS)检测各组血浆、尿液和脾、肝组织中的代谢物,运用主成分分析法(PCA)、正交偏最小二乘法(OPLS-DA)筛选血浆、脾组织、肝组织及尿液中潜在生物标志物,结合各生物标志物的相关代谢途径,分析当归补血作用机制,其结果如下。1.当归对APH与CTX联合所致血虚模型小鼠的影响结果:模型组与空白组比较,外周血RBC、WBC、HGB、PLT含量及胸腺指数、脾脏指数显著性下降(p<0.01);与模型组比较,当归水煎液不同剂量组均有不同程度的提高外周血RBC、WBC、HGB、PLT含量及胸腺指数、脾脏指数(p<0.05)的作用,其中以当归水煎液中剂量组作用效果最好。表明当归能够通过提高血虚小鼠外周血RBC、WBC、HGB、PLT含量及胸腺、脾脏指数而达到补血作用。2.当归对血虚模型小鼠血浆的GC-MS检测结果:各组血浆中鉴定出24种共有代谢物,主要为脂肪酸类、糖类、氨基酸类等物质。模型组与空白组的PCA得分矩阵图中,样本点完全分离,说明造模后小鼠的正常生理功能被干扰,从机体生理内源性代谢物变化的层次也可以认为血虚模型造模成功。采用变量重要性投影(VIP)方法寻找各组之间的差异生物标记物表明,模型组与空白组相比,甘氨酸、乳酸、花生四烯酸、硬脂酸、苹果酸、缬氨酸、棕榈酸、苏氨酸含量升高(p<0.05),脯氨酸含量下降(p<0.05);当归水煎液不同剂量组与模型组相比,甘氨酸、乳酸、花生四烯酸、硬脂酸、苹果酸、缬氨酸、棕榈酸、苏氨酸含量下降(p<0.05),脯氨酸含量升高(p<0.05),以上物质变化与空白组比较,有接近空白组的趋势,其中以当归水煎液中剂量组作用效果最好。3.当归对血虚模型小鼠脾组织的GC-MS检测结果:各组脾组织中鉴定出21种共有代谢物,主要也为脂肪酸类、糖类、氨基酸类等物质。模型组与空白对照组的PCA得分矩阵图中,样本点完全分离。采用VIP方法寻找各组之间的差异生物标记物表明,模型组与空白组相比,乳酸、硬脂酸、苹果酸、缬氨酸、丁酸、花生四烯酸、苏氨酸、甘氨酸含量升高(p<0.05),丙氨酸、脯氨酸,果糖含量下降(p<0.05);当归水煎液不同剂量组与模型组相比,乳酸、硬脂酸、苹果酸、缬氨酸、丁酸、花生四烯酸、苏氨酸、甘氨酸含量下降(p<0.05),丙氨酸、脯氨酸,果糖含量升高(p<0.05),以上物质变化与空白组比较,有接近空白组的趋势,其中以当归水煎液中剂量组作用效果最好。4.当归对血虚模型小鼠肝组织的GC-MS检测结果:各组肝组织中鉴定出21种共有代谢物,主要为脂肪酸类、糖类、氨基酸类等物质。模型组与空白对照组的PCA得分矩阵图中,样本点完全分离。采用VIP方法寻找各组之间的差异生物标记物发现,模型组与空白组相比,乳酸、丙氨酸、缬氨酸、硬脂酸、甘氨酸、棕榈酸、苏氨酸、丁酸、苹果酸含量升高(p<0.05),果糖含量下降(p<0.05);当归水煎液不同剂量组与模型组相比,乳酸、丙氨酸、缬氨酸、硬脂酸、甘氨酸、棕榈酸、苏氨酸、丁酸、苹果酸含量下降(p<0.05),果糖含量升高(p<0.05),以上物质变化与空白组比较,有接近空白组的趋势,其中以当归水煎液中剂量组作用效果最好。5.当归对血虚模型小鼠尿液的GC-MS检测结果:各组尿液中鉴定出21种共有代谢物,主要为脂肪酸类、糖类、氨基酸类等物质。APH与CTX对模型组小鼠尿液中代谢物随时间轨迹进行分析发现,模型组小鼠在第9天,对小鼠尿液中的代谢物作用影响最大。采用VIP方法寻找各组之间的差异生物标记物表明,模型组与空白组相比,柠檬酸、琥珀酸、甘油、α-酮戊二酸、木糖醇含量显著下降(p<0.05),葡萄糖含量显著升高(p<0.05);当归水煎液组与模型组相比,葡萄糖含量显著下降(p<0.05),柠檬酸、琥珀酸、甘油、α-酮戊二酸、木糖醇含量显著升高(p<0.05),以上物质变化与空白组比较,有接近空白组的趋势。当归对APH与CTX联合导致的小鼠血虚证具有一定的缓解作用,表现为RBC、WBC、HGB、PLT含量升高,免疫器官胸腺指数、脾脏指数的提高。GC-MS检测到血浆、脾组织、肝组织、尿液中代谢物有所变化,主要涉及到阻碍脂肪酸代谢、能量代谢障碍及氨基酸代谢絮乱。APH与CTX所致血虚证是由机体脂肪代谢障碍、细胞内外渗透压破坏以及糖酵解功能失调所引起。而当归可以使脂肪代谢障碍、细胞内外渗透压破坏以及糖酵解功能失调呈现出负反馈现象,由此可知当归补血作用与改善线粒体功能、能量代谢、脂类代谢,维持细胞内外渗透压平衡及提高免疫功能有关。
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