研究背景和目的多单元型微丸片在临床应用和工业化生产中具有显著优势,但其技术难度大,工艺条件苛刻,影响因素众多。目前微丸压片技术的研发主要集中在欧美、日本等少数制剂发达的国家,全球仅有少量品种上市,国内相关研究还未见比较成熟的工艺报道。本研究分别以泮托拉唑钠作为极易溶于水的酸中不稳定药物的模型药物一、以及另一性质相反的米非司酮作为不溶于水、溶解度呈pH依赖性药物为模型药物二,用渗透型薄膜包衣微丸片给药技术,针对两个溶解性完全相反、溶解度范围跨度很大的模型药物,克服稳定性和pH依赖性等特殊理化性质的挑战,采用不同的处方方法和工艺手段,研究微丸片制剂给药技术对易溶药物至不溶药物群的适用性、技术瓶颈、优势和应用前景。试制符合上市要求的微丸片,并进行体外质量研究和部分动物体内功能试验,为类似候选药物群提供新的给药剂型选择。方法1.泮托拉唑钠微丸片的制备和表征在空白糖丸外包药物层或制备载药骨架丸芯得到含药丸芯,之后包中性隔离层、耐酸肠溶层和外包衣层得到用于压片的渗透型微丸。将微丸和筛选得到的指定微晶纤维素组合总混压片,在合适的饲料速度和压片速度下压制得到耐酸力合格的泮托拉唑钠微丸片。研究采用显微镜观察法、计数法、统计法对各层包衣丸进行了物理表征;测定了各层包衣丸的密度和圆整度;用SEM法(Scanning electron microscope,SEM)观察包衣层的特征并测定膜层厚度;考察了上药混悬液的稳定性;研究了各膜层丸子的引湿性;研究了外包衣层厚度、微晶纤维素组合对微丸片抗酸力的影响;建立了高效液相色谱法测定含量、有关物质、药物释放、耐酸力的方法;对自制泮托拉唑钠微丸片和上市泮托拉唑钠微丸胶囊(泮立苏(?))的超加速稳定性和加速稳定性进行了平行对比。2.米非司酮胃滞留缓释微丸片的制备和表征用挤出滚圆法制备微粉化米非司酮载药丸芯,然后对载药丸芯进行缓释功能层包衣和黏附功能层包衣,得到米非司酮胃滞留缓释微丸;另外采用湿法制粒制备微粉化米非司酮速释颗粒;将米非司酮胃滞留缓释微丸、米非司酮速释颗粒和其他外加辅料混合后压制微丸片,制得米非司酮胃滞留缓释微丸片,该微丸片同时具备速释和缓释两相释放。研究采用了不同的溶解度测定方法对溶解度、增溶剂和增溶方法进行了选择研究;确认了米非司酮溶解度随pH升高而陡降的拐点;选择了合适的增溶剂和增溶方法;确证了米非司酮溶解对吸收的重要影响;选择了胃滞留功能层聚合物,并通过体外流通池法对比了米非司酮普通片(后定诺(?))和自制胃滞留缓释微丸片在pH 4.5条件下的释放;设计离体猪胃米非司酮微丸粘附实验,确认了微丸的胃滞留能力;并进行了 Caco-2单层细胞的透过量研究,确证了增溶对吸收透过量有影响;对自制米非司酮胃滞留缓释微丸片和上市米非司酮普通片(后定诺(?))的加速稳定性进行了平行对比。3.米非司酮胃滞留缓释微丸的大鼠体内研究3.1大鼠体内胃滞留试验以米非司酮胃滞留缓释微丸、不带黏附功能层的米非司酮缓释微丸为试药,设置两个实验组,通过SD大鼠体内法考察微丸在胃中的滞留比例。36只SD大鼠(体重为180-220 g),禁食24小时后,一组灌胃给予指定数目的米非司酮胃滞留缓释微丸。另一组灌胃给予相同数目的米非司酮缓释微丸,在设定时间点处死后解剖,统计胃内滞留的微丸数。比较和评价大鼠体内微丸胃滞留的差异。3.2大鼠体内药代动力学研究试验以米非司酮胃滞留缓释微丸片和上市米非司酮普通片(后定诺(?))为试药,设置两个实验组,给药剂量5.2 mg/kg,灌胃给予。给药后在指定时间点取血并测定米非司酮的血药浓度。建立了测定血浆中米非司酮含量的HPLC法,并绘制血药浓度-时间曲线。将血药浓度用DAS2.2.1版软件分析,计算两组制剂的药代动力学参数。采用SPSS19.0统计软件对两组制剂的主要药代动力学参数进行独立样本t检验,对自制米非司酮胃滞留缓释微丸片和上市米非司酮普通片进行比较和评价。结果1.泮托拉唑钠微丸片的制备和表征自制泮托拉唑钠微丸片的各项研究结果表明:1)采用的空白糖丸SUGLETS(?)250/355为块状非圆整丸,其特有的丸芯形状可能是微丸压片时包衣外丸能够承受形变而不开裂的关键因素之一;2)药物层加入碱性物质可改善制剂的稳定性;3)隔离层中加入滑石粉可以改善药物层与肠溶层的隔离效果,提高制剂稳定性;4)微丸制备时,显微镜法测定包衣膜厚度的方法简洁快速,且更适合采用统计学算法,数据更为全面;5)肠溶丸引湿性最强,该结果提示肠溶层包衣过程中,可能会因为肠溶层物料的吸湿性高而导致包衣过程中瞬时局部水分过高,反向向隔离层和药物层的渗透,从而影响隔离层的致密性,影响药物层的稳定性;6)外包衣层增重为5%的情况下,微丸压片后耐酸力下降幅度最小,外包衣层显示了最佳的压片保护作用;7)当微晶纤维素Vivapur 200和Avicel PH102以重量比50:50混合后用于压片时,在合适的饲料速度和压片速度配合下,微丸片含量均匀度最佳,耐酸力最好;8)自制泮托拉唑钠微丸片的稳定性远优于上市泮托拉唑钠微丸胶囊(泮立苏(?)),预示自制片的货架有效期接近36个月。2.米非司酮胃滞留缓释微丸片的制备和表征自制泮托拉唑钠微丸片的各项研究结果表明:1)米非司酮溶解度随pH变化的拐点为3.0;2)2%β-环糊精溶液、2%吐温-20溶液和2%吐温-80对米非司酮的增溶作用达1000倍以上;3)微粉化原料的溶解速率明显提升且瞬时溶解度增加;4)米非司酮溶液在pH值瞬时变化时会析晶,析晶后的表观溶解度是测得的表观溶解度的6-10倍;5)选用富马酸作为酸性微环境调节剂,羟丙甲纤维素K100作为黏附层聚合物,体外流通池法测定释放结果表明,米非司酮胃滞留缓释微丸片的速释部分释放速率比普通片更高,缓释持续时间更长;6)离体猪胃米非司酮微丸粘附实验显示,胃滞留缓释微丸具有优异的胃滞留性能;7)Caco-2单层细胞的透过量研究表明,微粉化米非司酮透过Caco-2单层细胞的量约为米非司酮溶液透过量的1/10,预示着增溶作用对吸收透过量影响很大。3.米非司酮胃滞留缓释微丸的大鼠体内研究以米非司酮胃滞留缓释微丸、不带黏附功能层的米非司酮缓释微丸为试药,大鼠体内法考察微丸在胃中的滞留情况,发现无黏附功能层的微丸在大鼠体内30分钟已基本排空,而包有黏附功能层的缓释微丸2小时后滞留在大鼠胃内的比例为66.7%,说明米非司酮胃滞留缓释微丸表现了优异的胃滞留性能。组织解剖发现胃内滞留的米非司酮胃滞留缓释微丸大多数黏附在胃黏膜上,形成紧密的黏膜表面分散层。对米非司酮胃滞留缓释微丸片和米非司酮普通片进行大鼠体内药代动力学研究试验,将血药浓度用DAS2.2.1版软件分析,计算两组制剂的药代动力学参数。采用SPSS19.0统计软件对两组制剂的主要药代动力学参数进行独立样本t检验,结果表明,胃滞留缓释微丸片峰浓度Cmax和消除率CL较普通片均显著降低(p<0.001),显示胃滞留缓释微丸片具备缓释效果,且谷峰浓度波动降低;胃滞留缓释微丸片的平均AUC0-∞较普通片提高约99.8%(p<0.001),且变异系数更小,表明胃滞留缓释微丸片的生物利用度较普通片显著提高,且个体差异降低。结论本研究分别以泮托拉唑钠作为极易溶于水的酸中不稳定药物为模型药物一、以及另一性质相反的米非司酮作为不溶于水、溶解度呈pH依赖性药物为模型药物二,采用渗透型薄膜包衣微丸片给药技术,针对两个溶解性完全相反、溶解度范围跨度很大的模型药物,克服稳定性和pH依赖性等特殊理化性质的挑战,采用不同的处方方法和工艺手段:1)制备了耐酸力合格、稳定性优于上市泮托拉唑钠微丸胶囊(泮立苏(?))的泮托拉唑钠微丸片;2)制备了生物利用度显著高于普通片且个体差异降低的米非司酮胃滞留缓释微丸片;3)从制剂方法的角度,发现空白块状非圆糖丸可能是微丸压片时包衣外丸能够承受形变而不开裂的关键因素之一,合适增重的外包衣层在微丸压片时对功能膜层有重要的保护作用,选择合适的外加辅料,在合适的饲料速度和压片速度的配合下,才能制得合格微丸片。4)从研究方法学角度来看,发现显微镜法测定包衣膜厚度的方法更简洁快速,且更适合采用统计学算法。还发现用流通池法测定难溶药物的体外释放可以在很大程度上克服漏槽条件的限制。总而言之,研究认为微丸片给药技术适用于易溶至不溶药物群,但需要针对候选药物本身的理化特点,在微丸单元内进行功能设计与优化。本研究中和模型药物相关的研究和发现对类似性质药物的微丸片给药具有指导意义,研究发现的制剂方法和研究方法学普适于微丸片的研究。