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目的:本课题研究内容属基础研究,目的是通过家兔软骨细胞的体外分离提取培养,给予持续机械应力作用,构建机械力诱导骨性关节炎发生早期软骨细胞模型,实验室进行分子及蛋白水平检测,揭示cofilin信号通路在软骨细胞应力传导中的作用,观察Cofilin信号通路在骨性关节炎软骨细胞中的调控作用及对软骨细胞骨架重组的影响。为Cofilin信号通路在骨性关节炎疾病中的作用奠定理论基础及提供实验依据。方法:本实验通过家兔软骨细胞提取分离及原代培养,应用MTT法验证细胞生长周期,测定生长曲线,观察其贴壁情况,通过甲苯胺蓝染色及II型胶原免疫组化进行细胞鉴定,根据软骨细胞的原代培养表型鉴定结果,证实软骨细胞活性较高,保持了原有的细胞活性,是实验的理想细胞。进一步采用静压力法成功构建机械力诱导骨性关节炎发生早期软骨细胞模型,通过体外培养、形态学观察、甲苯胺蓝染色、II型胶原免疫组化及流式细胞术检测细胞周期及凋亡参数发现,该模型组细胞接近临床实际,操作简单,是一种较理想骨性关节炎损伤早期体外培养细胞模型,证明模型构建成功。在无菌条件下,取10KPa,8h/d,4d机械压力诱导下的骨性关节炎早期软骨细胞做为模型组,另设未给予压力加载条件的细胞为空白对照组。进行细胞总RNA提取,并行逆转录和PCR扩增后,分别通过RT-PCR及Western blot检测Cofilin基因及蛋白表达,确定Cofilin信号通路是否参与到骨性关节炎损伤发病机制中。结果:本实验通过RT-PCR及Western blot检测Cofilin基因及蛋白表达,我们发现Cofilin在机械力诱导骨性关节炎发生早期软骨细胞模型组细胞中呈高表达,同对照组正常软骨细胞相比,有显著性差异(P<0.05)。提示Cofilin基因及蛋白表达可能与骨性关节炎早期软骨细胞的生物学特性相关,Cofilin信号通路参与到骨性关节炎的发病机制中,但具体作用机制尚有待进一步研究。为进一步研究Cofilin与肌动蛋白作用的方式、细胞内信号调节的精细机制,及作为细胞骨架蛋白重组中重要信号转导通路Cofilin在分子水平层面中进一步揭示骨性关节炎早期软骨细胞的发病机制,及其为下一步药用研究提供实验和理论依据。