卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤,严重威胁妇女的生命和健康。浆液性卵巢癌是其中最主要的病理类型。目前卵巢癌的发病、转移机理仍不清楚。近年来诸多研究提示,肿瘤是一种分子病,肿瘤的特异表现很可能是由深层次的基因改变造成的,而其产物——蛋白质是细胞功能的最终执行者,故本论文的目的在于,从蛋白质表达水平的角度来探讨卵巢癌的发生发展机制。首先,通过双向电泳技术获得了10例浆液性卵巢癌组织和10例正常卵巢上皮组织进行了总蛋白表达胶图,用PDQUEST软件进行对比分析,找出在浆液性卵巢癌组织和正常卵巢上皮组织中表达差异2倍以上并有统计学意义(P＜0.01)的蛋白质点。挖取并富集这些差异蛋白质点进行MALDI-TOF-TOF质谱鉴定。其次,选取了其中的6个蛋白质：GGCT, GMFB, HDGF, Rho GDI 2, BANF1,和Galectin-1,采用western blot的方法检测它们在20例浆液性卵巢癌组织和20正常卵巢上皮组织中的表达情况,以检验双向电泳及质谱鉴定的准确性。接着,为了观察相应的基因表达情况,又采用了实时荧光定量RT-PCR的方法检测了相应的6个基因：GGCT, GMFB, HDGF, ARHGDIB, BANF1,和Galectin-1在同样20例浆液性卵巢癌组织和20正常卵巢上皮组织中的表达情况。然后,选取了一个在人类肿瘤中研究较少的蛋白质-GMFB,扩大样本量,采用免疫组织化学的方法,检测了其在245例各种不同程度的卵巢上皮性病变(44例正常卵巢上皮组织,51例良性浆液性囊腺瘤,40例交界性浆液性腺瘤,110例浆液性卵巢癌)中的表达情况,分析了GMFB蛋白质表达与浆液性卵巢癌临床及组织病理学参数的关系,并采用了单因素和多因素模型的方法,进一步判断了GMFB蛋白质表达与浆液性卵巢癌患者预后的关系。最后,本研究基于RNAi干扰的方法,从细胞水平进一步探讨了GMFB对浆液性卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。本研究最终在每张胶图上平均约分离到1800个蛋白质点,找出63个差异表达的蛋白质点,并成功鉴定到其中的61个,代表54个独立的蛋白质。Western blot验证表明相对于正常卵巢上皮组织,GGCT, GMFB, HDGF, Rho GDI 2在浆液性卵巢癌组织中表达上调(P<0.001),而BANF1,和Galectin-1在浆液性卵巢癌组织中表达下调(P<0.001),其表达变化趋势与前期双向电泳及质谱结果完全吻合,一定程度上证实了前期工作的可靠性。与于正常卵巢上皮组织比较,HDGF和ARHGDIB基因在浆液性卵巢癌组织中表达上调(P＜0.0001), BANF1和Galectin-1基因在浆液性卵巢癌组织中表达下调(P<0.0001),它们的表达变化趋势与蛋白质表达变化趋势相同；然而,GGCT和GMFB基因在正常卵巢上皮组织和浆液性卵巢癌组织中的表达未发现明显差异。免疫组化结果发现,GMFB蛋白质在正常卵巢上皮组织及三种卵巢上皮性病变中表达有显著差异(P<0.0001),且从正常卵巢上皮组织,到良性浆液性囊腺瘤,交界性浆液性腺瘤,再到浆液性卵巢癌,表达逐渐上调,并与浆液性卵巢癌患者的临床分期相关(P=0.012)。生存分析提示,GMFB与浆液性卵巢癌患者的总体生存率(P=0.003)和无瘤生存率(P=0.010)相关,而且多元回归模型分析揭示GMFB是浆液性卵巢癌患者总体生存(P=0.006)和无瘤生存(P=0.026)的独立预后因子。RNAi干扰技术成功沉默GMFB在SKOV3细胞株中的表达,基因沉默组肿瘤细胞增殖力明显下降(P<0.05)。总之,蛋白质组学技术是发现及筛选肿瘤相关蛋白质的有力手段。GGCT, GMFB, HDGF, Rho GDI 2, BANF1,和Galectin-1等差异蛋白质可能与浆液性卵巢癌的发生发展相关,也可能是潜在的分子标志物。GMFB可能通过促进细胞增殖而参与浆液性卵巢癌发生发展过程,它同时也是一个新发现的浆液性卵巢癌独立预后因子,还可能是潜在的有前途的肿瘤靶向治疗靶点。第一部分上皮性浆液性卵巢癌组织和正常卵巢上皮组织中差异表达蛋白质的分离和鉴定目的：分离和鉴定浆液性卵巢癌组织和正常卵巢上皮组织之间差异表达的蛋白质。方法：提取10例浆液性卵巢癌组织和10例正常卵巢上皮组织的总蛋白,利用双向电泳技术进行蛋白分离,采用硝酸银染色法进行凝胶染色,PDQUEST软件分析电泳图谱,找出在两组中表达差异2倍以上并有统计学意义(P＜0.01)的蛋白质点。手工挖取并富集这些差异蛋白质胶点,采用硝酸银染色兼容的串联质谱方法,MALDI-TOF-TOF MS,对这些蛋白质进行鉴定。结果：共得到60张双向电泳图谱,每张约有1800个蛋白质点,找到63个差异表达的蛋白质点,成功鉴定出其中的61个,分别代表54个互不相同的蛋白质。结论：运用双向电泳结合串联质谱技术筛选到的54个在正常卵巢上皮组织和浆液性卵巢癌组织中差异表达的蛋白质可能与浆液性卵巢癌的发生、发展有关。蛋白质组学技术是发现和筛选肿瘤相关蛋白质的有效手段。第二部分部分差异表达蛋白质的验证及其基因水平表达的研究目的：进一步检验其中6个蛋白质,GGCT, GMFB, HDGF, Rho GDI 2, BANF1,和Galectin-1,在正常卵巢上皮组织和浆液性卵巢癌组织中的差异表达情况,进而验证双向电泳及质谱技术的准确性；检测相应的6个基因在两组组织中的表达情况,并与蛋白质表达改变趋势进行比较。方法：收集20例正常卵巢上皮新鲜组织和20例浆液性卵巢癌新鲜组织,分别提取总蛋白和总RNA, Western blot方法检测蛋白质表达,real time RT-PCR方法检测mRNA表达。结果：GGCT, GMFB, HDGF, Rho GDI 2在浆液性卵巢癌组织中表达上调,BANF1和Galectin-1在浆液性卵巢癌组织中表达下调。HDGF, ARHGDIB基因在浆液性卵巢癌组织中表达上调,BANF1和Galectin-1基因在浆液性卵巢癌组织中表达下调,GGCT和GMFB在浆液性卵巢癌组织和正常卵巢上皮组织中表达没有显著差异。结论：1、6个蛋白质表达验证结果与双向电泳及质谱结果完全相符,前期差异蛋白质分离鉴定过程可信。2、HDGF,ARHGDIB,BANF1,Galectin-1基因表达变化趋势与蛋白质相同；GGC与GMFB基因水平没有明显变化,提示此两种蛋白表达可能受翻译或翻译后水平机制的调控。第三部分GMFB在浆液性卵巢肿瘤中的表达分析及预后相关分析目的：扩大样本量,检测GMFB在卵巢上皮组织,良性浆液性囊腺瘤,交界性浆液性腺瘤及浆液性卵巢癌中的表达；分析GMFB与浆液性卵巢癌患者临床病理参数及生存率的关系。方法：制作44例正常卵巢上皮组织,51例良性浆液性囊腺瘤,40例交界性浆液性腺瘤,110例浆液性卵巢癌石蜡切片,收集该组浆液性卵巢癌患者的临床病理资料及生存资料,采用免疫组织化学的方法检测GMFB的表达,采用多种统计学方法进行结果分析。结果：GMFB蛋白质在正常卵巢上皮组织及三种卵巢上皮性病变中表达有显著差异,且从正常卵巢上皮组织,到良性浆液性囊腺瘤,交界性浆液性腺瘤,再到浆液性卵巢癌,表达逐渐上调,并与浆液性卵巢癌患者的临床分期相关。高GMFB表达与浆液性卵巢癌患者的低总体生存率和低无瘤生存率相关,多元回归模型分析揭示GMFB是浆液性卵巢癌患者总体生存和无瘤生存(P=0.026)的独立预后因子。结论：1、GMFB可能参与浆液性卵巢癌的发生发展过程。2、GMFB是浆液性卵巢癌独立预后因子,还可能是潜在的的肿瘤分子标志物和靶向治疗靶点。第四部分GMFB表达对SKOV3细胞株增殖的影响目的：探讨GMFB对SKOV3细胞增殖力的影响,初步阐明GMFB在浆液性卵巢癌中的作用机制。方法：合成特异性的siRNA,转染入SKOV3细胞株中,沉默其中GMFB的表达,观察沉默前后肿瘤细胞增殖能力的变化。结果：GMFB基因沉默组SKOV3细胞增殖力明显下降。结论：GMFB可能通过促进肿瘤细胞增殖从而在浆液性卵巢癌发展过程中起作用。Vll