Rhodococcus sp. R04对联苯类衍生物的降解特性研究

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当今世界环境污染问题日益严重,因此环境治理也成为世界各国人们所关注的话题。然而,在众多的污染物处理方法中,备受青睐的还是生物处理法,此法不仅具有经济、有效等特点更为重要的是它不会产生二次污染,具有环境友好性。研究发现,微生物在环境修复中起着举足轻重的作用,其中红球菌就是其中的一种,它可以降解多卤代联苯、烃类、木质素、煤和石油类等物质。本文首次采用HPLC法对Rhodococcus sp. R04降解多氯联苯、多溴联苯、多氟联苯的能力进行了研究,同时考察了不同取代元素以及取代元素的数量、位置等因素对Rhodococcus sp. R04降解以上几种多卤代联苯的影响,结果表明:Rhodococcussp.R04降解多卤代联苯的能力较强,受多卤代联苯取代元素的数量、位置等因素的影响,产生了不同的降解效果,表现为:联苯第四位上氢分别被卤族元素氟、氯、溴以及甲基基团取代后降解率由高到低依次为4-FB>4-CB≥4-MB>4-BrB;当取代元素相同时,随着取代原子数目的增加,降解率降低;当取代元素及取代原子数目相同时,不同位置的取代对卤代联苯的降解影响较大,特别是2,6位取代会极大的阻碍联苯双加氧酶以及2,3-二羟基联苯1,2-双加氧酶对苯环2,3位间的进攻,影响这两种酶的催化效率,最终导致其降解率降低。多卤代联苯的有氧开环代谢途经中会产生黄色开环化合物,我们采用光谱、色谱等方法对其进行了检测,发现黄色开环化合物是多卤代联苯氧化开环降解途径的标志物,该化合物与卤代联苯的降解有着极大的关系,此物质的积累会使多卤代联苯上游降解途径阻断在这一步,从而限制了多卤代联苯的顺利降解。鉴于漆酶在有毒化合物降解方面的作用,本文进一步展开了该酶对多卤代联苯中间代谢物-黄色开环化合物的催化实验,结果表明:漆酶可以作用黄色开环化合物使其转化,由于卤代联苯的不同,漆酶对其中间代谢物的转化效率也不同,对4-FB、4,4’-FB和4-CB产生的黄色开环化合物有较强的催化能力,0.045 U的漆酶可将其黄色立刻全部褪去;对于3,4-CB和4-MB所产生的黄色开环化合物的转化能力相对较弱,加入0.045U的漆酶后,于室温中放置60 min后,其黄色才完全褪去;而对于2,4’,5-CB所产生的黄色开环化合物的转化能力则进一步降低,将酶量增至0.45 U并于9小时后才可将其黄色完全褪去。由于红球菌在降解石油燃料中的硫化物方面有广泛的应用,我们对Rhodococcussp.R04以及其敲除多氯联苯代谢相关基因后突变菌株的降解能力也分别进行了研究。结果表明:红球菌R04只有经过含有联苯的基础培养基诱导后才可以降解DBT,三天后可以将其几乎降解完全;而其突变菌株(ΔA、ΔB、ΔC、ΔD)以及在LB中活化的R04均不能降解DBT,可见,菌株R04降解DBT可能与降解联苯是同一条代谢途径,联苯降解代谢途径中的酶同时也在DBT的降解中起作用,这两个降解途径是由同一个基因簇控制的。
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