转化生长因子-β1对人支气管上皮细胞间充质转化及Six1基因表达影响的研究

来源 :青岛大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:PeterWang9898
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目的:探讨TGF-β1对人支气管上皮细胞间充质转化及Six1基因表达的影响。方法:体外培养人支气管上皮细胞(16HBE),构建上皮-间充质转化模型。采用倒置显微镜观察各组细胞形态的变化;采用Real-time PCR检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、α-肌动蛋白、纤维黏连蛋白及Six1基因m RNA表达的情况;采用Westernblotting检测E-钙黏素、波形蛋白、α-肌动蛋白、纤维黏连蛋白及Six1蛋白的表达变化。结果:1.倒置显微镜结果示:对照组细胞呈单层,细胞间连接较为紧密;处理组A细胞形态变化不明显;处理组B部分细胞出现肥大、拉长,细胞间连接紧密性下降;处理组C细胞形态变化较为明显,呈梭行,同时细胞间隙增大,丧失典型的铺路石样特征。2.RT-PCR检测结果示:对照组细胞可正常表达E-钙黏素基因、波形蛋白基因、纤维黏连蛋白基因、α-肌动蛋白基因及Six1基因m RNA;与对照组相比较,处理组A其E-钙粘素基因、α-肌动蛋白基因m RNA表达量降低(P值分别为0.862、0.566,均>0.05),Six1基因m RNA表达量增高(P值为0.102>0.05),差异均无统计学意义,波形蛋白基因、纤维黏连蛋白基因m RNA表达量显著升高(P值分别为0.003、0.006<0.01),差异有统计学意义。处理组B其E-钙粘素基因m RNA表达量明显减少(P=0.042),波形蛋白基因、纤维黏连蛋白基因、α-肌动蛋白基因及Six1基因m RNA表达量均显著增加(P=0.000、0.001、0.031、0.023,均小于0.05),与对照组相比差异均有统计学意义。处理组C其E-钙粘素基因m RNA表达量显著减少(P=0.004<0.01),波形蛋白基因、纤维黏连蛋白基因、α-肌动蛋白基因及Six1基因m RNA表达量均明显增加(P=0.004、0.003、0.023、0.004,均小于0.05),与对照组相比差异均有统计学意义。3.Westernblot检测结果示:对照组细胞能够正常表达E-钙粘素、α-肌动蛋白、纤维黏连蛋白、波形蛋白及Six1蛋白。与对照组相比,处理组A细胞中E-钙粘素表达减少(P=1.023>0.05),α-肌动蛋白、纤维黏连蛋白及波形蛋白的表达量增高(P值分别为0.789、0.542、0.624,均>0.05),但差异均无统计学意义,Six1蛋白表达量增加(P=0.028<0.05),差异有统计学意义;处理组B细胞中E-钙粘素表达量明显减少(P=0.011<0.05),α-肌动蛋白、纤维黏连蛋白、波形蛋白及Six1蛋白的表达量均显著增加(P值分别为0.002、0.001、0.004、0.009均<0.01),与对照组相比差异均有统计学意义;处理组C细胞中E-钙粘素表达量显著减少(P=0.009<0.01),α-肌动蛋白、波形蛋白及Six1蛋白的表达量显著增加(P值分别为0.008、0.003、0.007,均<0.01),纤维黏连蛋白表达量明显增加(P值为0.017<0.05),与对照组相比差异均有统计学意义。且随TGF-β1作用时间越长,Six1蛋白表达越高,各组间有显著性差异(F=33.50)。结论:TGF-β1可能通过上调Six1的表达诱导气道上皮细胞间充质转化,从而参与哮喘气道重塑。
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