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Na+偶联的中性氨基酸转运蛋白（Sodium-coupled Neutral Amino Acid Transporters，SNATs）属于SLC38基因家族。根据功能特性和调控模式，SLC38家族又分为System A和System N两个亚型。其中，SNAT2属于System A；SNAT3属于System N。SNAT2和SNAT3均由504个氨基酸组成，理论分子量约为56kDa。它们在转运氨基酸的同时会同向转运一个Na+，且转运过程对pH敏感。SNAT3由SLC38A3基因编码，主要定位于星形胶质细胞的细胞质膜上，通过反向转运一个H+的方式共转运氨基酸。SNAT2是System A中的第二个成员，广泛表达于哺乳动物组织中，其功能紊乱会导致多种神经退行性疾病。SNAT2与SNAT3在大脑的谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏的糖异生、大脑和肝脏的氨解毒等生物通路中发挥着重要作用。鉴于SNAT2和SNAT3具有重要的生理功能，深入探索其结构和功能具有重要意义。 为了方便检测大鼠谷氨酰胺转运蛋白SNAT3在细胞膜上的表达与定位，本研究采用PCR扩增和酶切连接技术将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与SNAT3的N末端连接，通过菌液PCR、酶切和DNA测序验证得到pBK-CMV(Δ[1098-1300])-EGFP-SNAT3重组真核表达质粒。用脂质体转染法将构建好的质粒瞬时转染进入人胚胎肾细胞（HEK293T cells），利用激光扫描共聚焦显微镜和Western blot技术检测EGFP-SNAT3融合蛋白的表达和亚细胞定位。结果表明，EGFP-SNAT3重组质粒在细胞中正确表达并定位于细胞膜上。EGFP-SNAT3重组质粒的成功构建将有助于日后进一步研究SNAT3的结构和功能。 SNAT2被预测具有11个跨膜结构域，N端定位在细胞内，C端定位在细胞外。为了确定SNAT2中N、C端的膜定位、跨膜结构域的数量和各跨膜结构域的分布情况，本研究通过PCR扩增产生突变的方法，将HA标签插在了已预测的SNAT2中的亲水区，构建了17个带有HA标签序列（YPYDVPDYA）的SNAT2突变体。通过脂质体转染法将构建好的质粒瞬时转染进HEK293T细胞中，并经间接免疫染色法和激光扫描共聚焦显微镜技术确定了插入的HA标签在细胞膜中的定位，从而初步确定了SNAT2分子的TMS数量。同时，本研究利用免疫荧光技术确定了SNAT2中N端与C端的膜定位。结果表明，SNAT2具有10个跨膜结构域，N、C端均定位于细胞膜外。这与之前已报道的结果有所不同。