目的:研究扇贝裙边提取物—糖胺聚糖(SS-GAG)对巨噬细胞脂蛋白受体及脂蛋白氧化功能的影响,探讨SS-GAG的抗动脉粥样硬化(AS)的分子机制。 方法:1.采用小鼠的单核巨噬细胞株(RAW264.7),建立氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的巨噬细胞损伤模型,运用MTT比色分析法研究SS-GAG对巨噬细胞的毒性作用及细胞氧化损伤后增殖活性的影响。 2.以体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,通过黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸显色法等多种生化的方法观察SS-GAG对巨噬细胞氧化低密度脂蛋白(LDL)过程中的产物丙二醛(MDA)和共轭双烯、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD),、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的影响。 3.以体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学的方法检测SS-GAG对OX-LDL损伤的巨噬细胞的低密度脂蛋白受体(LDL-R)蛋白表达和基因转录的影响。 4.以体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化的方法检测SS-GAG对OX-LDL损伤的巨噬细胞的高密度脂蛋白受体(SR-BI)蛋白表达和基因转录的影响。 5.以体外培养的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SS-GAG对OX-LDL损伤的巨噬细胞的清道夫受体CD36基因转录的影响。 结果:1.SS-GAG100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml药物组巨噬细胞的增值活性与正常对照组比较无显著差别(P>0.05),表明实验所用浓度范围内SS-GAG对细胞无明显的毒性反应。 2.OX-LDL50μg/ml与小鼠的单核巨噬细胞RAW264.7作用24小时后能明显抑制RAW264.7细胞的增值活性。与模型组比较,SS-GAG各剂量组均可提高OX-LDL损伤引起的巨噬细胞增殖活性降低,以SS-GAG400μg/ml组作用最强,药物剂量小于400μg/ml时存在量效关系。 3.LDL与巨噬细胞孵育24h后,细胞内的MPO活性升高、GSH-PX活性降低,脂质过氧化物MDA和共轭双烯的生成明显增多;与模型组比较,扇贝糖胺聚糖在100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml浓度时可明显提高GSH-PX活性,降低MPO活性,降低脂质过氧化物的生成,且存在一定的剂量效应关系。 4.OX-LDL50μg/ml与单核巨噬细胞RAW264.7作用24小时后能降低LDL—R的蛋白表