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海胆的主要卵黄蛋白,因大量存在于海胆卵中而曾一度被归为卵黄蛋白原。但不同于其它物种的雌性特有,MYP同时存在于海胆精巢和卵巢中,为配子发生及胚胎发育提供营养。比对发现,其cDNA序列与其他物种卵黄蛋白原并无明显相似性,而与铁传递蛋白具有更高的相似性。据其存在场所和合成时期的差异,MYP可分为为CFMYP和EGMYP,二者均由同一基因编码。因其特殊性,国内外相关研究很多,并仍在持续进行。光棘球海胆不仅是我国重要的增养殖品种之一,且在发育生物学、遗传学、分子生物学等学科均有很好的科研价值。本实验选用光棘球海胆,对其主要卵黄蛋白MYP基因区域进行相关研究,旨在为MYP的下一步研究奠定基础。利用基因组步移方法,获得了MYP基因上下游未知序列,并通过常规PCR及克隆测序等获得基因组9个内含子的序列。在研究过程中,利用生物信息学对MYP上下游序列进行顺式作用元件分析。并选用基因下游,及内含子20的核苷酸序列进行SNPs检测。现将实验结果总结如下:1、经3次步移及克隆测序,获得MYP基因上游1782bp,应用生物信息学预测了其启动子,得到两条启动子序列P1和P2,P1起始于-96bp,P2起始于-565bp,两条序列均为50bp。在P1、P2序列中分别包含有GC box,GAGA box和CAAT box。推测MYP基因的两条启动子序列,在胚胎发育的不同时期分别对母源性卵黄蛋白(EGMYP)和体腔卵黄蛋白(CFMYP)的表达具有不同的调控作用。利用Tfsitescan软件,在MYP基因上游区域发现含有多种顺式作用元件,如:AP1-TRE0/C、NRE_Box1_CS、IRF-E、ASK-MP4等。这说明MYP的表达调控方式复杂,受多条信号通路的共同调节。2、经2次基因组步移和一次常规PCR,获得了MYP基因下游共1182bp的序列。经Clustalx比对处理,得有效长度821bp。认为所得到的区域为光棘球海胆MYP编码前体mRNA的DNA序列,可被识别并转录形成前体mRNA,但在前体mRNA的后期剪接过程中被除去,并不参与后期功能蛋白的合成。经鉴定,在所获得的MYP下游区域序列中,存在两种信号元件,效率元件(EE)ATATAT(59bp-64bp),和定位元件(PE)TTTTTTTT(347bp-354bp)。这些元件可能在MYP mRNA的后期剪辑、折叠、以及相关反式作用因子的识别与定位中起一定作用。3、MYP下游区域序列中,存在一些SNP突变位点,如622位存在A—G转换,648位存在T缺失等。这些突变可能影响到后期mRNA的修饰,而导致功能蛋白质的差异。4、获得MYP基因内含子5、6、11、14、15、16、17、18、及20的全部序列,总长5036 bp。经网上进行Blast发现,该九段序列均为新发现的未知序列。对部分内含子进行SNP检测,得内含子20的189位存在A—C突变,这些突变可能影响到前体mRNA的处理与修饰,从而在蛋白质水平造成差异。以上将为进一步研究MYP基因的表达调控和全基因的SNPS筛选奠定基础。