嗜酸氧化亚铁硫杆菌是革兰氏阴性、化能自养菌,能通过氧化Fe²⁺、各种还原性硫化物以及H₂提供生长能量。外膜蛋白是嗜酸氧化亚铁硫杆菌的重要组成成分,在物质转运、信息识别、细胞吸附等方面起着重要作用。外膜蛋白的分离是对其进行进一步研究的必要条件,但是传统的分离方法耗时长、仪器设备要求高、步骤繁多,同时很难严格地将质膜蛋白与外膜蛋白区分开来。本论文以大肠杆菌为模式菌,运用温度诱导的双水相萃取分离技术建立了一种快速、有效的分离革兰氏阴性细菌外膜蛋白的方法体系。系统地研究了不同浓度的Triton X-114对外膜蛋白提取效率的影响,结果表明8%的Triton X-114为外膜蛋白分离的合适浓度。为摸索Triton X-114的最佳处理时间,以8%的Triton X-114分别处理未经机械破碎的嗜酸氧化亚铁硫杆菌1h、2h、3h、4h、5h,发现处理3h后外膜蛋白的提取效率达到最佳。分离得到的蛋白质样品,经透析除盐处理后,可用于双向电泳分析。通过对比实验发现双向电泳样品裂解液中包含低浓度的Tris是外膜蛋白双向电泳成功的关键,CHAPS与ASB-14或NP-40结合使用比单独使用CHAPS效果更佳,可显著提高外膜蛋白的溶解能力,增加蛋白斑点,缩短聚焦时间,从而优化了外膜蛋白双向电泳技术体系,建立了外膜蛋白双向电泳图谱。采用优化后的双水相萃取分离体系选择性分离了嗜酸氧化亚铁硫杆菌的外膜蛋白。对所分离到的蛋白质样品进行了双向电泳分析,并建立了不同能源基质培养条件下嗜酸氧化亚铁硫杆菌外膜蛋白的双向电泳差异图谱。为进一步研究不同能源基质培养条件下嗜酸氧化亚铁硫杆菌外膜蛋白差异蛋白质组学奠定基础。