RNA干扰livin基因对肿瘤细胞电离辐射生物效应的影响

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Livin是IAP家族的重要成员,具有独特的分子结构,在肿瘤组织中特异性表达。Livin具有抑制细胞凋亡、参与细胞周期调控等生物学作用,与肿瘤细胞对辐射及化疗药物的耐受性增强密切相关,是目前肿瘤靶向治疗研究关注的重要基因之一。本研究旨在探讨Livin蛋白在X射线诱导HeLa细胞凋亡过程中所发挥的生物学作用。采用Western Blot检测X射线照射后HeLa细胞Livin蛋白表达变化,采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期及细胞凋亡的变化规律。结果显示,Livin在HeLa细胞中异常高表达并且具有较高的转录水平;单纯X射线照射不能诱导HeLa细胞发生凋亡;受照细胞的G2/M期细胞比例随受照剂量的增高而显著增加,并且在接受4.0 Gy照射后随着培养时间延长,G2/M期细胞比例也显著增加。由于Livin具有组织表达特异性,使其成为RNAi技术应用的理想靶向基因。根据RNAi原理,利用pSilencer3.1-H1 neo载体能够转录产生小的发卡状siRNA的特点,本研究成功构建了以livin基因为靶点的pSilencer3.1-H1 neo-livin载体,在mRNA水平干扰Livin蛋白表达,进而对Livin蛋白在X射线诱导HeLa细胞凋亡过程中所产生的生物学影响进行研究。结果表明,RNA干扰livin基因,Livin蛋白表达受抑制后,电离辐射可以显著诱导HeLa细胞凋亡,并且在照射后12h干扰组细胞G2/M期比例显著高于空质粒组,表现明显G2期阻滞。以上结果说明,干扰Livin蛋白表达与辐射相结合可诱导HeLa细胞凋亡,明显提高肿瘤细胞的辐射敏感性。本研究结果将为增强肿瘤辐射敏感性、提高放射治疗疗效提供实验依据。有重要理论意义及潜在应用价值。
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