解淀粉芽孢杆菌HRH317产抑菌物质发酵条件及其稳定性研究

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本试验主要研究解淀粉芽孢杆菌HRH317产抑菌物质发酵条件及其理化稳定性。通过单因素试验和正交设计从不同碳源、氮源、碳源氮源总量及碳源氮源比例、表面活性剂、微量元素等方面对HRH317菌株的液体发酵培养基进行优化;在得到最适发酵培养基的基础上通过单因素试验研究了发酵时间、发酵温度、初始pH、接种量、接种菌龄、装液量、摇床转速对发酵液抑菌活性的影响,之后通过响应面法系统地确定了HRH317菌株抑菌物质的最佳发酵条件;采用二倍稀释法对发酵液中抑菌活性物质进行效价测定;对解淀粉芽孢杆菌HRH317抑菌物质进行初步确定并从贮存稳定性、对不同蛋白酶的敏感性、对不同金属离子的稳定性等理化稳定性进行了研究。主要研究结果如下:1.单因素试验和正交设计结果表明,最优发酵培养基为1g葡萄糖、1g酵母膏、0.5gNaCl、0.1g吐温20、0.075gMgSO4、100mL水。2.通过响应面设计得出最优发酵条件为接种菌龄21h、接种量3.8%、发酵时间25h、发酵温度37℃、发酵初始pH7.0.100mL三角瓶中装液量30mL、摇床转速150r/min。3.采用二倍稀释法测定得出优化发酵条件后发酵液中抑菌活性物质的效价为2560AU/mL,匕原始发酵条件提高了100%。4.通过对菌株HRH317所产生的抑菌物质进行初步确定性试验,表明该抑菌活性物质来自过氧化氢和蛋白类或多肽类物质。对该菌株的发酵上清液进行理化性质的研究表明,该抑菌物质具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,贮存在4℃条件下60d抑菌活性仍然可保持为原始发酵液的88.65%;对胃蛋白酶和胰蛋白酶较敏感,对蛋白酶K和木瓜蛋白酶具有一定的耐受性;K+、Mg2+、Mn2+可增强抑菌活性,Zn2+、Cu2+、Al3+、Fe2+、Na+则部分抑制其抑菌活性,Ca2+对抑菌活性无明显影响;聚乙二醇、吐温20、吐温80三种表面活性剂对其抑菌活性的影响不大。以上试验表明该抑菌物质不仅具有很好的抑菌活性,而且具有良好的稳定性,可用于开发新型生物防腐剂。
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