犬新孢子虫（Neospora caninum）是寄生于牛、羊、犬等多种哺乳动物细胞内的一种原虫。犬新孢子虫主要引起母畜流产、死胎或新生儿运动障碍和神经系统疾病。新孢子虫病可垂直传播，对牛的危害极为严重，已成为危害养牛业健康发展的主要因素之一。但犬新孢子虫对胎盘的损伤及其机制目前尚不清楚。为确定牛源犬新孢子虫对胎盘的损伤作用，本研究以BALB/c小鼠为实验动物，在建立牛源犬新孢子虫孕鼠感染模型的基础上，对孕鼠胎盘组织细胞进行病理学损伤观察，孕鼠胎盘相关细胞因子检测，孕鼠胎盘细胞凋亡相关蛋白检测，以及影响孕鼠胎盘物质转运、胎盘血流和胎儿生长发育等各项胎盘激素指标检测，以此阐明牛源犬新孢子虫感染对胎盘组织细胞的损伤作用，以期为犬新孢子虫致病作用的研究奠定基础。　　1、牛源犬新孢子虫孕鼠感染模型的建立　　本试验以雌性BALB/c小鼠为实验动物，分离Vero细胞中犬新孢子虫速殖子，分不同剂量组腹腔接种雌性BALB/c小鼠，第二天与雄性BALB/c小鼠合笼，每天观察小鼠临床症状和发病情况。应用检测犬新孢子虫Nc5基因的PCR方法在攻虫后第12 d即可以在胎盘中检测到虫体DNA，成功建立了牛源犬新孢子虫孕鼠感染模型，确定了每个模型小鼠的攻虫剂量为105个虫体。　　2、牛源犬新孢子虫对孕鼠胎盘组织细胞的损伤观察　　本试验以牛源犬新孢子虫孕鼠感染模型为研究对象，测定了胎盘重量和胎盘系数，病理学观察孕鼠胎盘组织细胞损伤变化，流式细胞术检测胎盘滋养层细胞凋亡情况。结果表明，模型组孕鼠随攻虫天数的增加，体重降低，伴有流产现象，总胎数和活胎数均有不同程度的减少，多成为死胎或吸收胎；与对照组比较，胎盘重量和胎盘系数均有统计学意义；病理学观察发现，模型组孕鼠随攻虫天数的增加，胎盘的损伤程度逐渐加大；胎盘细胞凋亡数量也随着攻虫时间的延长而增加。说明牛源犬新孢子虫感染对孕鼠胎盘具有一定的病理性损伤，主要对胎盘滋养细胞的损害，影响胎盘的物质转运和激素的合成，致使胎儿生长发育迟缓、死产、流产等现象的发生。　　3、牛源犬新孢子虫感染孕鼠胎盘相关细胞因子检测　　本试验以建立的牛源犬新孢子虫孕鼠感染模型为研究对象，检测孕鼠胎盘细胞悬液中IFN-γ、IL-4及TGF-β含量。结果表明，在孕鼠胎盘细胞悬液的检测中，模型组孕鼠随攻虫天数的增加IFN-γ和IL-4浓度均有不同程度的波动，但整体倾向于不利胎儿生长发育的方向发展。尤其模型组孕鼠TGF-β浓度随攻虫天数的增加逐步上调，已严重影响胎儿的正常生长发育。　　4、牛源犬新孢子虫感染孕鼠胎盘细胞凋亡相关蛋白检测　　本试验以牛源犬新孢子虫感染孕鼠模型为实验动物，应用免疫组化法检测孕鼠胎盘组织中细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及TNF-α表达情况。结果表明，Bax、TNF-α的表达上调和Bcl-2表达量下调，可能启动内、外源性的细胞凋亡途径，使胎盘细胞凋亡增加，致使胎盘缺氧、缺血，导致胎儿流产、早产。　　5、牛源犬新孢子虫感染孕鼠胎盘激素检测　　本试验采用ELISA法检测牛源犬新孢子虫感染后孕鼠血清中CRH、ACH、CG、PL及E3等激素含量变化，以此确定牛源犬新孢子虫感染后对孕鼠胎盘功能和胎儿生长发育的影响。结果显示，牛源犬新孢子虫感染孕鼠在妊娠中期血清中CRH、ACH、CG、PL及E3等胎盘激素含量均有显著下调现象，而且在整个妊娠过程中模型组孕鼠随攻虫天数的增加与对照组比较，5种胎盘激素均出现了显著性波动变化，这种相互作用、相互影响的变化是牛源犬新孢子虫感染所致孕鼠胎盘组织病理损伤和滋养层细胞凋亡增加的病理生理基础。而这些激素含量显著变化的结果必然导致不良妊娠现象的发生。　　结论：　　1、本试验成功建立了牛源犬新孢子虫感染 BALB/c孕鼠模型，确定了每个模型小鼠的攻虫剂量为105个虫体。　　2、牛源犬新孢子虫感染孕鼠的胎盘重量和胎盘系数与对照组比较均有统计学意义，病理学观察发现牛源犬新孢子虫感染对孕鼠胎盘具有一定的病理性损伤，胎盘滋养细胞破坏，影响胎盘对胚胎所需营养物质的转运和胎盘激素的合成。　　3、牛源犬新孢子虫感染孕鼠随攻虫天数的增加，孕鼠胎盘细胞悬液中IFN-γ、IL-4及TGF-β浓度整体倾向于不利胎儿生长发育的方向发展。　　4、牛源犬新孢子虫感染孕鼠胎盘组织中Bax、TNF-α的表达上调和Bcl-2表达量下调，可能启动内、外源性的细胞凋亡途径，使胎盘细胞凋亡增加，致使胎盘缺氧、缺血，导致胎儿流产、早产。　　5、牛源犬新孢子虫感染孕鼠在妊娠中期血清中CRH、ACH、CG、PL及E3等激素含量的显著下调，是牛源犬新孢子虫感染所致孕鼠胎盘组织损伤和细胞凋亡增加的病理生理基础，其结果必然导致不良妊娠的发生。