前言宫颈癌是全球妇女中仅次于乳腺癌的第二个最常见的恶性肿瘤。在我国,宫颈癌的每年新发病例为13.15万,约占世界新发病例的三分之一。死亡率居女性癌症死亡率的第二位,在女性生殖器官癌症中居首位。肿瘤的生物学特性不仅取决于核内遗传物质,而且与核外的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)亦有一定的关系。由于mtDNA无组蛋白的保护,缺乏DNA修复系统,处在高氧化应激环境中,容易受电子传递链产生的自由基的损伤,与化学致癌物的亲和力较核基因组高等原因,使mtDNA具有较高的突变率,可能具有潜在的致癌性,就像外源性遗传物质如DNA病毒或RNA病毒在细胞核基因组中整合,从而诱导细胞恶性转化一样。线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,mtTFA)由核基因编码,在细胞质中合成,转运入线粒体中发挥作用,与mtDNA紧密关联,是线粒体转录和复制的关键激活子。近年研究发现mtTFA在快速增长的肿瘤中表达上调,可能参与调控与肿瘤发生发展有关的基因的表达。能够特异性地识别并结合损伤的mtDNA,结合后,抑制了修复酶对mtDNA损伤的识别和结合,进而导致肿瘤的发生。mtTFA还能同p53相互作用在凋亡中发挥重要作用。可见,mtTFA可能与肿瘤发生存在较为密切的关系,本实验即观察宫颈癌组织中mtTFA的mRNA水平,以期阐明线粒体转录因子A与宫颈癌发生、发展的关系。实验材料与方法1、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)标本来源:选择在中国医科大学附属盛京医院妇产科手术切除的宫颈癌患者的60份标本(其中30例癌组织为实验组,30例癌旁正常宫颈组织为对照组),癌旁正常组织均为距癌组织0.5厘米以上的正常宫颈组织(均经病理学证实)。所有患者术前均未接受放、化疗及激素治疗。RNA抽提:取约10-20mg的组织,按照RNA提取试剂盒说明书提取组织RNA。置于紫外分光光度计上波长为260nm和280nm处测量吸光值,计算两者的比值,选取比值在1.7～2.0者用于逆转录反应。逆转录cDNA:cDNA合成严格按试剂盒说明书进行,20μl的体系,合成的cDNA储存在-20℃的冰箱中用于PCR反应。PCR反应体系于94℃预变性3min,94℃变性35s,49℃退火1min,72℃延伸1min,35个循环,72℃延伸10min。结果观察:pCR产物7μl与1μl6*loading buffer混合,于1.5%琼脂糖凝胶电泳,成像仪观察结果并摄像。2、统计学处理mtTFA mRNA表达水平用均数±标准差表示,数据用SPSS16.0统计软件进行统计学处理,mtTFA mRNA表达水平组间比较用ANOVA方差分析和t检验,P<0.05为差异有统计学意义。实验结果1、宫颈癌和癌旁正常宫颈组织中mtTFA mRNA的表达MtTFA在宫颈癌组织中的表达量为0.28±0.10,在癌旁正常组织中的表达量为0.19±0.13,宫颈癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织,两者比较有显著性差异(P<0.05)。2、比较mtTFA mRNA表达量与临床病理参数之间的相关性线粒体转录因子A的表达量与病理学分级有关,而与临床分期、有无淋巴结转移和年龄等临床参数无明显相关性。结论1、mtTFA在宫颈癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织,两者比较有显著差异(P<0.05)。2、mtTFA的表达量与病理学分级有关,而与临床分期、有无淋巴结转移和年龄等临床参数无明显相关性。3、宫颈癌组织中mtTFA的异常表达可能与宫颈癌的发生、发展有关。