鸡输卵管囊肿衣原体MOMP基因克隆、序列测定及斑点杂交检测

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本试验首先对内蒙古地区分离的鸡输卵管囊肿衣原体进行培养试验,分别接种5—7日龄SPF鸡胚、L929、Vero、BHK-21细胞培养观察,结果表明该衣原体分离株仅能引起个别SPF鸡胚死亡,且死亡无规律性,三种细胞对其敏感性强弱依次为L929>Vero>BHK-21细胞。其次,根据国外报道的禽衣原体MOMP基因两端保守序列设计合成一对引物,以提取的衣原体基因组DNA为模板,PCR扩增、克隆了MOMP基因,并对其进行了测序。最后,用地高辛随机引物法标记成MOMP基因核酸探针,斑点杂交检测衣原体基因组DNA,灵敏度可达10pg,且不能检出其它病原体的核酸。将核酸探针法与补体结合反应法对衣原体感染的诊断进行比较,初步证明该探针具有较高的敏感性与较强的特异性。
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