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恶性肿瘤的两个主要特征是其细胞无节制性生长和向其邻近组织侵袭或远隔部位的转移。一百多种肿瘤相关基因参与肿瘤的起源和发展,它们的表达产物多种多样,其中有些位于细胞膜。肿瘤相关细胞膜蛋白单克隆抗体在肿瘤诊断、治疗以及探索肿瘤相关基因等研究领域中有重要意义。 用本室新近建立的小鼠树突状细胞肉瘤(DCS)细胞系107细胞腹腔注射免疫大鼠,取其脾与大鼠骨髓瘤细胞IR983F融合,制备了与小鼠正常组织未见明显交叉反应的单抗983D4,其亚类类为lgG2a,该抗体还与某些小鼠肿瘤MFC,LA795,B22等有交叉反应,其抗原分子量约38kD,28kD。用983D4单抗处理DCS细胞,观察DCS细胞体外生长速度、软琼脂克隆形成、运动能力、水解酶活性,粘附性,侵袭性和和体内转移率等生物学行为,结果发现:983D4能轻度抑制DCS生长和软琼脂克隆形成,但对DCS自身粘附及对FN、LN基质粘附、运动、水解、侵袭转移能力等方面均未发现明显作用,为了进一步认识该抗原的性质,首先构建DCS细胞cDNA表达文库,然后用983D4进行筛选。 用异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提一步法提取DCS细胞总RNA 1.13mg,甲醛变性胶电泳分析其质量。利用oligo-dT纤维素层析柱分离poly(A)mRNA 8.4ug,逆转录酶作用下合成cDNA第一链,E coli DNA polymerase I催化合成cDNA第二链,α32p掺入碱性凝胶电泳分析cDNA 片段大小,分布范围集中于400-3000bp。SephacrylS400离心柱除去小分子量cDNA片段后,双链DNA与E coR1 adaptor相连,磷酸化adaptor,再与EcoRl酶切的脱磷酸化的λgt11 arms相连,E coli extract包装重组DNA即为cDNA表达文库。文库总滴度1.11×106pfu,兰斑数10%。在1.5%LB琼脂平板上行文库的铺平板培养,硝酸纤维素滤膜