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血吸虫病(Schistosomiasis)至今仍然是一个全球性公共卫生问题,数以百万计的人受其威胁。主要是由血吸虫(Schistosome)尾蚴感染而引起的一种寄生虫病。血吸虫病的防治方法仍然以吡喹酮的给药治疗为主,但是目前已有报道长期使用吡喹酮可以诱导产生抗药性。因此目前发展高效、安全的疫苗是持续控制血吸虫病的一种理想的研究方向。细胞凋亡是由多基因严格控制的细胞程序性死亡。细胞凋亡对维持生物体正常的生长发育以及内环境的稳定具有重要作用。本课题组前期的研究表明,不同适宜性宿主来源的日本血吸虫童虫在形态、发育以及虫体细胞凋亡现象方面都存在显著的差别,推测细胞凋亡可以影响日本血吸虫虫体的生长发育。BAD 是 Bcl-2 相关的死亡启动子(bcl-2 associated death promoter),.属于 Bcl-2家族的促凋亡基因,仅含有BH3。本文SjBAD的基因序列来自欧洲分子生物学实验室数据库(EMBL,http://www.ebi.ac.uk/),基因编号为 SjD AY814710.1,设计特异引物,选用42d虫体cDNA为模板。PCR扩增,克隆了日本血吸虫SjBADORF编码的部分基因,长度为594bp,编码197个氨基酸。选用pET-28a(+),构建了重组表达质粒pET-28a(+)-SjBAD,并将其转化到大肠杆菌BL21中,成功诱导了重组蛋白pET-28a(+)-SjBAD,分子质量约为27kDa。实时定量PCR分析表明SjBAD基因在日本血吸虫虫体的各个发育阶段均有转录,在14d虫体中表达量最高,随后随着虫体的生长,相对表达量逐渐降低,在42d雄虫的表达量高于雌虫。Western blotting分析表明重组SjBAD具有较好的抗原性和免疫原性。间接ELISA分析表明重组蛋白免疫小鼠产生了高水平的特异性IgG抗体。动物免疫试验表明,同PBS对照组相比较,重组蛋白SjBAD在BALB/c小鼠体内诱导了 27.50%和33.57%的减虫率,及39.80%和42.06%的肝脏虫卵减少率,差异都非常显著。成功构建了真核重组质粒pcDNA3.1(+)-SjBAD,并将其转染到293T细胞中,实时定量PCR检测表明SjBAD在转染293T细胞36h表达量最高,流式细胞术检测表明日本血吸虫促凋亡基因SjBAD能够促进293T细胞凋亡。本文为深入开展SjBAD的生物学功能研究,及筛选针对SjBAD的药物靶标提供了基础。