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在肾脏发育过程中,胚胎期肾小管上皮细胞是由间充质细胞分化而来。在胚胎发育晚期,间充质细胞慢慢失去其作为间充质细胞的表型,并同时逐步获得上皮细胞的形态和功能学特征,完成间充质细胞——上皮细胞(Mesenchymal—EpitheliumTransdifferentiation,MET)的表型转化。组织胚胎学理论认为,上皮细胞是成熟的终末功能细胞,一经发育成熟便不能再进一步分化。但近年来的研究表明,在某些疾病比如恶性肿瘤、肾脏慢性损伤的发生和发展过程中,存在着细胞的逆向分化现象:上皮细胞在特定的病理状态下,通过上皮细胞-肌成纤维细胞间的逆向转型成为具有多向分化功能的间充质细胞,即上皮细胞——间充质(Epithelium-MesenchymalTransdifferentiation,EMT)的逆向分化。EMT现象被认为是组织胚胎学界的一场革命。目前发现,EMT可能涉及细胞的迁徙、损伤修复、疾病的迁延等一系列细胞病理、生理功能。因此研究疾病状态下的EMT具有十分重要的意义。
在恶性肿瘤的发生发展过程中,EMT现象的出现可能预示着肿瘤细胞出现了两种或两种以上的表型,是肿瘤恶性程度增高的标志。此时EMT的结果可能给临床的诊断和治疗带来新的困难。血管内皮细胞发生EMT后导致细胞功能障碍也是各类血管疾病发生的重要因素。EMT与创伤修复密切相关。在神经疾病中,成熟的神经细胞能在一些特定条件的干预下被诱导逆向分化成为干细胞或幼稚细胞,干细胞或幼稚细胞再分化来修复损伤的神经细胞。皮肤在创伤或烧伤后的修复过程中,成熟的表皮细胞能在表皮细胞生长因子的作用下向表皮干细胞EMT,使损伤快速愈合。研究发现,EMT可能与肾小管上皮细胞再生、修复、纤维化等有密切关系。慢性肾损伤过程中我们曾发现逆向分化的存在,由肾小管上皮细胞——间充质细胞转化获得间充质细胞标记α-SMA。肾脏急性损伤过程中也涉及再生、修复等一系列病理生理过程,我们推测急性肾损伤过程中可能也存在EMT;肾小管上皮细胞可通过EMT逆向分化生成具有多向分化功能的间充质细胞,继而分化、参与肾小管的再生。
追溯到肾脏胚胎发育过程中,我们可以发现,EMT实际上是肾脏发育MET的一种逆向分化过程,其涉及了一系列参与、影响肾小管上皮细胞发育基因的开启和关闭。追溯到肾脏发育早期,间充质细胞群与输尿管芽开始接触时,一些基因获得启动调控肾脏的发育,其中研究得较为清楚的基因有Wilms肿瘤基因(WT1)及PAX家族基因pax2。有研究提示WT1、pax2可能互为靶基因。WT1、pax2的表达时间、部位、数量的消涨与肾脏发育过程中间充质细胞——上皮细胞分化存在密切的关系。WT1、pax2在肾脏发育早期便表达升高,随着肾小管上皮细胞的发育成熟,WT1、pax2表达逐渐下降至消失。正常的成年肾近曲小管细胞核内不表达pax2和WT1。胚胎学研究发现,WT1或pax2基因敲除小鼠的胚胎肾不能发育;WT1、pax2基因突变均引起肾肿瘤的发生或者肾脏畸形发育。我们前期的研究发现:在胚胎成熟后,上皮细胞内控制间充质细胞表型的基因信息并非完全消失而只是暂时关闭。在肾胚胎发育时WT1出现表达,肾脏发育成熟后表达几近消失,WT1基因呈关闭——开放——关闭的模式。在慢性肾损伤中WT1重新一过性开放,其重新开放可能与肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞逆向分化。
相对于进行性肾间质纤维化导致慢性肾衰,临床上急性肾衰病因复杂、病情变化迅速,且个体差异很大,临床缺乏快速诊断和疗效评价技术,故目前急性肾衰的治疗难以达到满意效果。肾前、肾后以及肾性的多种病因均可导致急性肾衰的发生。研究发现,在急性肾小管坏死的实验动物和患者的肾脏,大部分肾小管受损伤,随后发生一系列再生、修复事件,包括近曲小管S2/S3节段及髓袢降枝粗段(TALH)细胞的再生,残留肾小管上皮细胞的再生、修复,间质纤维母细胞的再生等,增殖细胞通过正向分化,修复肾单位的功能完整性,肾脏局部许多因子参与了肾脏小管的再生过程。结合以上研究背景,我们假设:肾小管上皮细胞在肾脏急性损伤的情况下,也可能出现逆向分化,转变为具有增殖分化潜能的间充质细胞,在特定的肾脏局部环境诱导下,参与肾小管上皮细胞的再生、修复。为此,我们以急性缺血再灌注损伤动物和PTEC(肾近曲小管上皮细胞)体外培养为研究模型,采用放射免疫学、分子生物学及免疫化学等技术,熏点观察肾脏急性损伤后肾小管上皮细胞是否发生EMT,倘若如此,将进一步深入研究可能涉及EMT的细胞和分子学发生机制。