天然产物GA的生物活性及抗菌增效应用研究

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目的研究天然产物GA的生物活性及抗菌增效作用。通过研究GA对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)以及生长曲线的作用,研究GA对S.aureus生物膜(biofilm,BF)的生成及清除作用,研究GA对S.aureus的抑菌机理,研究GA和抗生素协同抑菌作用,为解决临床上细菌性疾病的治疗提供参考。方法二倍稀释法测定GA与抗生素的MIC。采用紫外法测定GA和抗生素对S.aureus生长曲线。选择最适拟合方程,构建拟合方程模型,结合生长曲线及模型参数,阐述抑菌机理。结晶紫法测定生物膜生成量,倒置显微镜下观察生物膜结构。采用稀释涂布法,研究GA对生物膜内细菌活性作用。苯酚硫酸法测定S.aureus胞外总多糖含量,紫外法测定GA对S.aureus体内磷代谢的影响,试剂盒方法测定碱性磷酸酶的含量,电泳法测定GA对S.aureus体内蛋白表达的影响。棋盘法研究GA和抗生素联用对S.aureus浮游菌及生物膜的作用。结果GA的MIC为125μg/m L,头孢拉定的MIC为1.22μg/m L,阿莫西林的MIC为1.22μg/m L,左氧氟沙星的MIC为0.24μg/m L,罗红霉素的MIC为0.305μg/m L,庆大霉素的MIC为0.98μg/m L。GA和抗生素主要通过调节细菌生长延迟期时间、对数期陡幅、总菌落数影响生长曲线。最适拟合方程为修正Gompertz方程。GA和抗生素对S.aureus生长曲线的作用规律是通过调节细菌的生长速率、细菌的最大生长量、细菌生长的延迟期来实现抑制作用的。生物膜生成测定时间选择14 h。GA对生物膜形成曲线的作用表现为延长黏附期时间、降低成熟期时间及最大生物膜形成量。GA抑制S.aureus生物膜生成,且呈剂量依赖性;对细菌早期黏附有抑制作用。GA对成熟生物膜没有清除作用,对生物膜内细菌活性没有抑制作用。GA对S.aureus的抑菌机理表现为抑制胞外总多糖的合成,胞内蛋白的表达,改变细胞膜的通透性,对细胞壁没有作用。GA与抗生素联用对S.aureus浮游菌及生物膜活性有显著影响,降低给药浓度,表现为协同作用。结论GA具有很好的抑菌活性。GA和抗生素的作用规律即通过调节细菌生长速率,细菌的最大生长量,细菌生长的延迟期来实现抑制作用的,GA与庆大霉素对S.aureus生长曲线作用规律相似。GA抑制S.aureus生物膜生成及细菌早期黏附,对成熟生物膜和生物膜内细菌没有作用,GA抑制胞外总多糖的合成和胞内蛋白的表达,进一步阐述了GA的抑菌机制。GA与抗生素联用对抑制S.aureus浮游菌及生物膜生成有减量增效作用。
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