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第一部分sTRAIL-TMTP1融合蛋白的表达纯化及生物学效应研究【目的】利用原核表达系统表达纯化sTRAIL-TMTP1融合蛋白,纯化到足够量后体外作用肿瘤细胞株,研究其对细胞凋亡的影响,体内治疗前列腺癌皮下瘤模型及胃癌原位模型,观察其生物学效应。【方法】应用PET原核表达系统表达纯化sTRAIL-TMTP1融合蛋白;应用Western Blot及考马斯亮蓝染色检测融合蛋白的表达;运用流式细胞仪检测融合蛋白对肿瘤细胞株凋亡的影响;建立前列腺癌细胞株PC-3M-1E8皮下瘤模型,瘤旁注射融合蛋白治疗;建立胃癌MKN-45sci原位模型,腹腔内注射融合蛋白治疗;量子点、免疫组织化学检测融合蛋白的药物代谢和肿瘤组织及其他器官细胞凋亡情况。【结果】用考马斯亮蓝染色结果:经过纯化后融合蛋白可浓缩至1mg/ml浓度;Western Blot在22KD附近可以被TRAIL抗体识别的条带;在配对细胞株MDA-MB-231、MCF-7、PC-3M-1E8、PC-3M-2B4加入融合蛋白后48小时,光镜下出现明显差异,Anexin-V、PI双标流式细胞仪检测凋亡,在高低转移细胞株间存在统计学差异,在融合蛋白与对照组PBS中也存在显著性差异;免疫组织化学检测体内药物代谢,早期0.5-2h会出现肾脏一过性高表达,而后肿瘤组织中融合蛋白表达逐渐升高,至24h达到高峰,而心、肺等器官阴性表达;前列腺癌细胞PC-3M-1E8皮下瘤模型中,经过治疗后融合蛋白sTRAIL-TMTP1明显效果好于对照组,治疗一个周期(四周)后肿瘤直径存在显著性差异;胃癌细胞MKN-45sci肿瘤原位模型治疗后治疗组和对照组之间原位肿瘤的体积、转移灶的数量均存在显著性差异;体内实验中生存期组间也存在统计学差异。【结论】能通过原核表达系统来表达纯化融合蛋白sTRAIL-TMTP1,且融合蛋白对高转移性肿瘤细胞具有明显的促凋亡作用,且其在体内仍有明显靶向肿瘤作用,体内可抑制肿瘤生长、转移,延长实验动物生存期。第三部分GDF-5对大鼠肌腱细胞及腱鞘滑膜细胞增殖及凋亡的影响目的:观察生长分化因子5(GDF-5)对体外培养的大鼠肌腱细胞及腱鞘滑膜细胞增殖的影响。为进一步研究在体内局部添加GDF-5以促进损伤肌腱愈合及改善外源性愈合所致粘连打下基础。方法:MTT法测定不同浓度的GDF-5在体外对肌腱及腱鞘滑膜细胞增殖率的影响;流式细胞仪测定不同浓度的GDF-5在体外对肌腱及腱鞘滑膜细胞的凋亡率的影响。结果:GDF-5可以明显促进肌腱细胞的增殖,而对腱鞘滑膜细胞的增殖率的作用较弱。但对两种细胞的凋亡无明显影响。结论:添加一定浓度的GDF-5后肌腱细胞增殖率较腱鞘滑膜细胞提高更为明显,而凋亡并未发生改变。