亚硒酸钠对肺癌A549细胞自噬与凋亡的作用及分子机制的研究

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目的通过亚硒酸钠对肺癌细胞株A549抑制率和对其自噬与凋亡的观察,探讨亚硒酸钠对肺癌细胞的作用。方法将人肺癌A549细胞株分为空白对照组、0.5、2.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组,用不同浓度的亚硒酸钠培养液培养24h、48h后,MTT检测亚硒酸钠对肺癌细胞株A549的增殖的影响,免疫细胞化学染色法检测亚硒酸钠对自噬相关蛋白Beclin1、Lc3及凋亡相关蛋白cytc表达的影响;Western blot印迹法检测亚硒酸钠对自噬相关蛋白Beclin1、Lc3及凋亡相关蛋白cytc含量的影响。结果MTT法结果显示:人肺癌A549细胞株用不同浓度的亚硒酸钠培养24h,48h,后,随着浓度的增加,其吸光度值逐渐降低,24h、48h后当亚硒酸钠浓度大于0.5μmol/L时,实验各浓度与空白对照组比较其吸光度值显著降低(P<0.01)。免疫细胞化学SABC法检测Cytc蛋白的分布和Western blot印迹法检测细胞质Cytc含量变化的结果分别显示:亚硒酸钠可提高Cytc蛋白在肺癌A549细胞中免疫细胞化学染色的平均光密度值,24h时5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组相比免疫细胞化学染色的平均光密度值明显增强(P<0.05);48h时亚硒酸钠各组与空白对照组相比较免疫细胞染色的平均光密度值明显增强(P<0.05);Western blot印迹法结果为24h、48h亚硒酸钠各组与对照组相比细胞质Cytc蛋白表达逐渐升高(P<0.05)。免疫细胞化学SABC法和Western blot印迹法检测Beclin1蛋白表达分布及含量的结果分别显示:亚硒酸钠可提高肺癌A549细胞中Beclin1蛋白免疫细胞化学染色的平均光密度(MOD),24h时8μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组相比Beclin1蛋白的免疫细胞染色的平均光密度值有明显提高(P<0.05);48h时5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与对照组相比Beclin1蛋白的免疫细胞染色的平均光密度值有明显提高(P<0.05)。Western blot印迹法结果为24h、48h各亚硒酸钠组与对照组比较蛋白表达量有明显升高(P<0.05)。免疫细胞化学SABC法和Western blot印迹法检测LC3蛋白的表达结果分别显示:亚硒酸钠能够提高LC3蛋白在肺癌A549细胞中免疫细胞化学染色的平均光密度(MOD),24h时5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组相比LC3蛋白的免疫细胞染色的平均光密度值显著增强(P<0.05);48h时5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组相比LC3蛋白的免疫细胞染色的平均光密度值显著增强(P<0.05)。Western blot印迹法检测结果为24h、48h各亚硒酸钠组与空白对照组相比蛋白表达量显著升高(P<0.05)。结论亚硒酸钠能抑制肺癌A549细胞的生长,诱导细胞凋亡和自噬,其发生可能与将Cytc从线粒体释放到细胞质,上调Beclin1、LC3蛋白表达有关。
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