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背景与目的:膀胱癌是全球最常见的泌尿生殖系统恶性肿瘤之一,其在泌尿系统来源的恶性肿瘤中排名第二,具有高复发率和高死亡率的特点,且其发病率逐年上升。膀胱癌的进展过程十分复杂,涉及到多个基因、多个因素和多个步骤,其中,膀胱癌细胞异常的增殖能力发挥了至关重要的作用。目前,在机制上,对膀胱癌的研究取得了日新月异的进步;在临床上,对膀胱癌的治疗手段也在不断改进。但是,多种因素导致的膀胱癌治疗后复发及不良预后的难题仍然存在。因此,阐明膀胱癌的增殖机制,对我们认识膀胱癌和促进临床运用具有重大意义。研究表明,核内不均一核糖核蛋白F(Heterogeneousnuclearribonucleoprotein F,HnRNPF)在多个组织来源的恶性肿瘤中表达升高,起到促进肿瘤进展的作用。在前期研究中,我们证实,人膀胱癌组织中的hnRNPF在mRNA水平和蛋白水平表达升高,与患者预后不良密切相关;外源性过表达hnRNP F可促进膀胱癌细胞的侵袭能力、迁移能力以及EMT过程;hnRNP F可与Snail mRNA的3’UTR区结合并提高其mRNA稳定性,从而促进膀胱癌细胞发生EMT。本研究课题以前期研究为基础,拟检测hnRNP F蛋白在人膀胱癌组织中的表达情况,探讨hnRNP F蛋白对人膀胱癌细胞增殖能力的影响,并探究其影响膀胱癌细胞增殖的分子机制。第一章:HnRNP F在人膀胱癌组织中表达升高及促进膀胱癌细胞增殖研究方法:采用蛋白质免疫印迹方法检测人膀胱癌组织中hnRNP F蛋白的表达水平,构建hnRNPFshRNA慢病毒,转染并干扰膀胱癌细胞hnRNPF蛋白表达,采用MTT细胞增殖实验、平板克隆实验检测hnRNP F对膀胱癌细胞增殖能力的影响,采用免疫细胞化学检测hnRNP F对膀胱癌细胞KI67增殖指数的影响,采用流式细胞术检测hnRNP F对膀胱癌细胞周期分布的影响。结果:HnRNP F蛋白在膀胱癌组织中的表达量升高,且在EJ和UMUC-3细胞中表达较T24和5637细胞高;HnRNP F能促进膀胱癌细胞的增殖;HnRNP F能促进膀胱癌细胞周期G1/S期转换,加快细胞周期进程。第二章:HnRNP F促进膀胱癌细胞增殖的机制研究研究方法:采用质谱分析和免疫共沉淀实验探索与hnRNP F相互结合的促增殖分子,采用双荧光免疫共定位实验检测膀胱癌EJ和UMUC-3细胞株中hnRNPF与TPX2蛋白的空间分布情况,采用蛋白质印迹方法检测膀胱癌组织标本中hnRNP F与TPX2蛋白的表达关系,构建并转染过表达/干扰TPX2质粒改变膀胱癌细胞TPX2表达水平,采用蛋白质印迹方法检测TPX2过表达/干扰效率、TPX2对hnRNP F/cyclin Dl/p21蛋白的改变情况,采用MTT细胞增殖实验、平板克隆实验检测TPX2对hnRNP F的促膀胱癌细胞增殖能力的影响,采用流式细胞术检测TPX2对hnRNP F的促膀胱癌细胞周期的影响。结果:在膀胱癌细胞中,hnRNPF与TPX2蛋白相互结合且具有正相关表达关系;在膀胱癌细胞中,hnRNPF通过调控TPX2蛋白表达从而改变周期相关蛋白cyclin D1和p21的表达量,进而促进细胞周期进程,促进细胞增殖;干扰TPX2蛋白表达可以阻断hnRNP F的促膀胱癌细胞周期进程和促增殖作用。结论:HnRNP F通过调控TPX2表达促进膀胱癌细胞增殖。