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青蒿素类抗疟药双氢青蒿素(DHA)及其前药青蒿琥酯(ARS),是目前用于治疗恶性疟疾及多药耐药型疟疾的临床一线药物。双氢青蒿素是青蒿素类药物(青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯)的体内活性形式。由于双氢青蒿素结构中存在不稳定基团,对其在溶血血浆和全血中进行药动学和代谢过程研究时,DHA可能存在降解现象,从而引起实验结果的偏差甚至得到错误的结论。另外,单独使用青蒿素类药物有较高的复发率,相关报道称,青蒿素类药物在连续多次给药后,可能会使体内药物暴露量持续下降,自身诱导代谢被认为可能是上述现象出现的原因。连续给予青蒿素或蒿甲醚,它们的血药浓度出现逐渐下降的现象；但重复给予双氢青蒿素后,时间依赖性的药动学特征是否存在尚存在争议。为阐明双氢青蒿素潜在的时间依赖性药动学特征,从而为其临床合理用药提供理论依据,对双氢青蒿素及其前药青蒿琥酯在大鼠体内的时间依赖性药物动力学性质进行了研究；本文在此之前对双氢青蒿素的稳定性进行研究,寻找合适的稳定剂。1.双氢青蒿素的体外稳定性研究本章采用高效液相色谱串联紫外和高分辨率质谱法(HPLC-UV, HPLC-HRMS),对可能介导双氢青蒿素降解的因素进行体外考察,包括：高温、高湿、强光照射、有机溶剂、不同pH值的缓冲溶液、正常血浆、溶血血浆(含无机/有机铁、Fe2+、Fe3+、hemoglobin或者hemin)和全血。本章研究结果表明,双氢青蒿素在高温、高湿和强光照射下,存在不同程度的降解,而在有机溶剂中相对稳定,但存在构型转化,在血浆中主要以仅构型存在；双氢青蒿素在缓冲溶液中的降解是pH值和温度依赖的；溶血产物(有机铁和无机铁离子)中Fe2+,能介导双氢青蒿素快速降解,而Fe3+对介导其降解的作用不大；同时,通过体外方法获得了双氢青蒿素在溶血血浆和全血中的两种主要的降解产物,是含过氧键的半缩醛结构,表明双氢青蒿素在生物样本中的降解可能首先发生在环状半缩醛位置,而非过去认为的过氧桥；根据其降解机制筛选高效的稳定剂,在DHA的生物样本中(包括溶血血浆和全血)加入稳定剂(H2O2/EDTA·2Na),可使其在样品分析过程(包括在室温条件下的样品预处理过程,有机溶剂沉淀蛋白过程和仪器分析过程)保持稳定。2.双氢青蒿素及其前药青蒿琥酯在大鼠体内的时间依赖性药动学研究建立了应用液相色谱高分辨质谱联用技术测定大鼠血浆中的双氢青蒿素(或青蒿琥酯)及其主要Ⅰ相代谢产物(羟基化双氢青蒿素,M1)和Ⅱ相代谢产物(双氢青蒿素与葡萄糖醛酸结合物,a-DHA-G)测定方法。应用所建立的方法考查了单剂量给药和多剂量给药以及性别因素对双氢青蒿素(或青蒿琥酯)在大鼠体内动力学过程的影响。应用高分辨一级全扫描方式进行测定,以双氢青蒿素(或青蒿琥酯)及其Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物的分子离子峰提取离子流(EIC)进行定量分析。方法学验证结果表明本方法双氢青蒿素(或青蒿琥酯)和Ⅱ相代谢产物(a-DHA-G)分别在10.0-1000.0nM,20.0-2000.0nM的浓度范围内线性良好,二者的日内精密度和日间精密度均小于15%,准确度在7%以内。通过对比单剂量组和多剂量组大鼠体内动力学参数发现,经连续5日给药后,原形药物双氢青蒿素(青蒿琥酯)、主要的Ⅰ相代谢产物和Ⅱ相代谢产物均不存在时间依赖性动力学特征：随着给药时间的延长,最高血药浓度(Cmax),药时曲线下面积(AUC0-t)和口服清除率(CL/F)均无明显差异(P>0.05)。并且,双氢青蒿素在大鼠体内的动力学参数还表现出明显的性别差异：雄鼠体内的Cmax和AUCo-t显著高于雌鼠,同时CL/F显著小于雌鼠。但青蒿琥酯在大鼠体内的药动学参数不存在上述性别差异。