斜刺对挫伤模型兔骨骼肌CaN/NFAT1信号通路影响的实验研究

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:edisonckw
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研究目的:通过观察斜刺对急性骨骼肌钝挫伤模型兔一般整体情况及行为学、组织形态学、CaN蛋白和NFAT1蛋白表达的影响,探讨斜刺促进骨骼肌损伤后再生修复的机制。研究方法:家兔30只随机分为空白组(6只)、模型组(6只)、针刺组(6只)、CsA组6只、针刺合并CsA组(6只)。除空白组外,其余组采用重物自由落体撞击法造成急性骨骼肌钝挫伤模型。针刺组于造模24小时后采用毫针斜刺腓肠肌肌束的方法干预,CsA组于造模前3天开始注射CsA(环孢素A)9.25mg/kg,每天分2次进行腹腔注射,针刺合并CsA组进行针刺合并CsA干预,模型组不进行干预。分别于造模前、造模后24h(针刺干预即刻)、造模后72h(针刺后48h)对各组兔进行体重测量;于造模前、造模后24h(针刺干预即刻)、造模后48h(针刺后24h)、造模后72h(针刺后48h)对各组兔进行双腿腓肠肌周长测量,计算肿胀度;造模后72h(针刺后48h)进行取材,各组兔腓肠肌HE染色后光镜下观察肌纤维、肌细胞的变化情况,透射电镜观察腓肠肌超微结构变化;采用Western blot法检测CaN和NFAT1蛋白表达量。研究结果:1.斜刺可改善骨骼肌顿挫伤模型兔组织肿胀程度。各组兔体重均值于造模前、造模后24h(针刺干预即刻)、造模后72h(针刺后48h)各时间点无明显变化;肿胀度方面,与空白组相比,造模后各时间点其余组腓肠肌肿胀度均显著升高,与模型组相比,造模后CsA组、针刺组和针刺合并CsA组均减轻了腓肠肌肿胀度,针刺组减轻腓肠肌肿胀度效果最明显。2.从形态学角度观察,斜刺对骨骼肌钝挫伤后组织有明确的修复作用。光镜下观察模型组镜下肌细胞明显水肿,呈大小不规则,肌纤维间隙缩小、边界模糊不清,胞浆外漏,肌细胞间可见弥散型炎性细胞浸润;CsA组镜下肌细胞肿胀,但程度较模型组轻,炎细胞浸润程度也较模型组轻,出现少量空泡;针刺组肌纤维排列相对较连续,损伤局部炎性细胞浸润较模型组明显,呈聚集型分布,肌细胞整体排列较好;针刺合并CsA组肌纤维排列较乱,部分肌纤维溶解,并伴有炎性细胞浸润。透射电镜下观察各干预组均有不同程度促进损伤后超微结构的恢复,针刺组对组织损伤后超微结构的改善较其他干预组明显。3. Western blot检测CaN和NFAT1蛋白表达结果显示,与空白组相比其余组CaN蛋白均显著升高(p<0.05),与模型组相比,针刺组CaN蛋白表达显著升高(p<0.05),与CsA组相比,针刺组和针刺合并CsA组CaN蛋白表达均显著升高(p<0.05)。与空白组比较,模型组与针刺组NFAT1蛋白表达均显著升高(p<0.05或p<0.01);与模型组相比,针刺组NFAT1蛋白表达显著升高(p<0.05),CsA组和针刺合并CsA组NFAT1蛋白表达差异无统计学意义(p>0.05)。结论:1.斜刺可有效促进挫伤模型兔骨骼肌结构损伤后的恢复。CsA、针刺合并CsA干预均对挫伤模型兔挫伤后72h骨骼肌结构恢复有一定的促进作用。针刺与CsA合并使用后,CsA可影响针刺对挫伤模型兔骨骼肌损伤后的修复,可能与CsA抑制炎症反应有关。2. CaN/NFAT1信号通路在挫伤模型兔骨骼肌损伤后再生修复过程中具有重要的作用,斜刺可激活CaN/NFAT1信号通路促进骨骼肌损伤的再生修复。此外,根据本实验的研究结果,斜刺对于挫伤模型兔骨骼肌损伤的再生修复作用可能是通过多条通路实现的。
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