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黏膜免疫系统作为免疫防御的第一道防线,能够参与保护机体免受病原体的侵害。黏膜免疫系统以分泌型免疫球蛋白(slgs)为主要的防御因子。多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor, pIgR)是黏膜免疫中的重要组成成分,其特异性地转运sIgs通过上皮细胞保护机体。因此pIgR的有效分泌是多聚免疫球蛋白发挥黏膜防御功能的必要条件,在黏膜免疫中起着举足轻重的作用。目前对硬骨鱼类pIgR的研究已经日渐活跃,而pIgR与sIgs的免疫应答动态也备受关注。本文利用灭活鳗弧菌(Vibrio anguillarum)通过注射和浸泡两种方式免疫牙鲆(Paralichthys olivaceus),测定了免疫后牙鲆组织中pIgR与IgM基因水平的表达变化,并检测了免疫后牙鲆皮肤黏液、鳃黏液、肠黏液及胆汁中pI及IgM蛋白水平的表达变化,研究了血清、胆汁及三种黏液中的pI-IgM复合物,最后定位pIgR及JgM在牙鲆黏膜免疫相关组织中的分布,为进一步研究硬骨鱼类黏膜免疫机制奠定了基础。本文具体研究结果如下：用灭活鳗弧菌采用注射和浸泡两种方式对牙鲆进行免疫,利用实时荧光定量PCR法对免疫后牙鲆各组织中pIgR及IgM基因水平表达变化进行了测定。结果表明,免疫后的牙鲆各组织中pIgR基因的表达变化趋势与IgM基本一致,都呈现先上调后下调的趋势,然而pIgR基因水平上升比IgM快,到达峰值的时间也比IgM早.在皮肤、鳃和后肠中,浸泡组pIgR的峰值高于注射组,而在其余组织中,则低于注射组;在皮肤和鳃中,浸泡组IgM的峰值高于注射组,而在其余组织中,则低于注射组。利用ELISA法对鳗弧菌免疫后牙鲆pIgR及IgM蛋白水平的表达变化进行检测。结果表明,各免疫组中pIgR与IgM的蛋白水平变化趋势基本一致,在一段时间之内均呈现先上升后下降的趋势,然而pIgR蛋白水平上升比IgM快,到达峰值的时间也比IgM早。在皮肤黏液和肠黏液中,浸泡组pIgR的峰值较注射组高,而在鲤黏液和胆汁中,其峰值较注射组低：在皮肤黏液和鳃黏液中,浸泡组IgM的峰值较注射组高,而在肠黏液和胆汁中,其峰值较注射组低。将牙鲆血清、皮肤黏液、鳃黏液、肠黏液及胆汁在非变性电泳条件下进行Western blot实验。结果显示,抗牙鲆血清IgM单抗2D8和抗牙鲆皮肤黏液单抗1A2与牙鲆血清、皮肤黏液、鳃黏液、肠黏液及胆汁均反应,均在分子量约800kD处出现单一条带；抗牙鲆pIgR多抗与牙鲆皮肤黏液、鳃黏液、肠黏液及胆汁均在约800kDa处发生特异性反应,而与血清无特异性反应。利用抗牙鲆pIgR多抗及抗牙鲆IgM单抗2D8对牙鲆黏膜免疫相关组织皮肤、鳃、后肠及肝脏进行免疫组织化学染色。结果显示,两种抗体的染色结果大体一致,在四种组织中均出现了明显的红色阳性信号,而对照组中均未观察到阳性信号。pIgR阳性信号主要位于皮肤、鳃和后肠上皮细胞和黏液细胞及其表面,鳃和后肠上皮细胞及其基部,以及肝管壁上皮细胞。IgM阳性信号主要位于皮肤、鳃和后肠上皮细胞和黏液细胞,后肠上皮下固有层,肝管壁上皮细胞中。