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第一章大鼠BMSCs体外分离、培养、鉴定和标记[目的]探索SD大鼠骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells, BMSCs)体外分离、培养、鉴定及标记的方法。为下一步的移植研究提供充足的BMSCs。[方法]应用全骨髓贴壁改良法分离培养SD大鼠BMSCs,显微镜观察细胞形态,绘制细胞生长曲线。使用流式细胞仪检测细胞表面标记物及茜素红成骨诱导染色对第三代细胞进行鉴定。并对第3代细胞进行BrdU标记。[结果]体外培养的原代BMSCs生长旺盛,以梭形为主,细胞集落呈螺旋状。第3代BMSCs几乎均一表达CD29,CD90,而CD34,CD45几乎不表达。BMSCs经诱导能分化为成骨细胞,茜素红染色出现红色钙化结节。BrdU免疫组化结果显示,BMSCs标记率高达85.29%。[结论]改良的全骨髓贴壁法体外分离、培养及传代的SD大鼠BMSCs纯度高,活力强,性状稳定。BrdU标记法安全、高效。第二章血管性痴呆大鼠模型的制备[目的]探讨VD大鼠模型理想的制备方法,为下一步BMSCs移植研究提供VD大鼠模型。[方法]采用间隔3天永久性结扎双侧颈总动脉法制备VD大鼠模型。假手术组不结扎双侧颈总动脉,其余手术操作步骤相同。术后4周,采用Morris水迷宫试验测定模型大鼠的行为学表现。[结果]假手术组术后因饲养不当死亡1只,余9只。模型组大鼠存活59只,死亡18只,1只出现眼球变白、萎缩,3只未达VD标准。本实验成功制备55只VD大鼠。模型组大鼠造模后水迷宫的逃避潜伏期较假手术组明显延长,平台象限滞留时间比假手术组明显缩短(p<0.05)。模型组大鼠的存活率为76.62%,成模率为93.22%。[结论]改良双血管法具有死亡率低,成模率高,简单易行等优点,是制备VD大鼠模型的理想方法。第三章甘露醇对骨髓间充质干细胞静脉移植治疗血管性痴呆大鼠模型的疗效观察[目的]探讨甘露醇预处理对骨髓间充质干细胞移植治疗VD大鼠模型疗效及海马CA3区突触素表达水平的影响。[方法]造模4周后将VD大鼠随机分为空白对照组、培养基组、甘露醇组、BMSCs组、甘露醇预处理BMSCs组,分别给予相应的实验干预措施。观察干预4周后实验大鼠的行为学表现及应用免疫组化法检测海马CA3区突触素的表达水平。[结果]甘露醇预处理BMSCs组行为学较BMSCs组、培养基组、甘露醇组、空白对照组有明显改善(P<0.05),其逃避潜伏期缩短(P<0.05),平台象限滞留时间延长(40.75±6.29s,P<0.05),其海马CA3区突触素表达水平(39624±7797)亦比BMSCs组、培养基组、甘露醇组、空白对照组明显提高(27060±4667,19955±4243、18293±6445,18946±4953,P<0.05)。[结论]甘露醇预处理后静脉移植BMSCs显著改善VD大鼠行为学表现,并使其海马CA3区突触素表达显著增加。甘露醇预处理明显提高静脉移植BMSCs治疗VD大鼠的效果。