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目的:1、检测正常粘膜、结肠腺瘤、大肠癌中p16、hMLH1基因CpG岛甲基化状态,评价其在大肠癌发生中的作用及临床意义。2、检测正常粘模、锯齿状腺瘤、非锯齿状腺瘤、大肠癌中BRAF、β-catenin、COX-2的表达情况,探讨BRAF在大肠癌发生中的作用。方法:1、收集四川省人民医院2008年10月-12月手术及内镜下活检组织标本60例,其中大肠癌20例、腺瘤20例、正常组织标本20例。采用特异性甲基化PCR(MSP)方法检测p16、hMLH1基因的CpG岛甲基化状态。2、收集四川省人民医院2008年6月-12月石蜡包埋组织标本50例,其中大肠癌标本20例,锯齿状腺瘤10例、非锯齿状腺瘤10例、正常肠粘模10例,采用免疫组化(IHC)方法同时检测BRAF、β-catenin、COX-2蛋白的表达。结果:1、MSP方法检测发现大肠癌中p16启动子CpG岛甲基化阳性表达率为30%(6/20例),腺瘤和正常组织中未检测到p16基因CpG岛甲基化。大肠癌组与腺瘤组、正常组之间有显著性差异(p=0.020,0.020),而腺瘤组与正常组之间无显著性差异(p＞0.05)。hMLH1启动子CpG岛甲基化阳性表达率在大肠癌和腺瘤中分别为25%(5/20例)、10%(2/20例),而正常组织中未检测到hMLH1基因CpG岛甲基化。大肠癌组与正常组之间有显著性差异(p=0.047),其余各组之间无显著性差异(p＞0.05)。p16、hMLH1基因CpG岛甲基化与Dukes分期、肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度的关系之间有统计学意义(p＜0.05),与肿瘤部位、性别的关系之间无统计学意义(p＞0.05)。2、免疫组化(IHC)方法检测发现:BRAF蛋白在大肠癌组织、锯齿状腺瘤、非锯齿状腺瘤、正常组织中阳性表达率分别为80%(16/20例)、100%(10/10例),40%(4/10例)、10%(1/10例),其中大肠癌及锯齿状腺瘤的BRAF蛋白表达与非锯齿状腺瘤及正常组织之间BRAF蛋白表达有显著性差异(p＜0.05);β-catenin在大肠癌、锯齿状腺瘤、非锯齿状腺瘤、正常组织中的阳性表达率分别为70%(14/20例)、50%(5/10例)、60%(6/10例)、0%(0/10例)。大肠癌、锯齿状腺瘤及非锯齿状腺瘤的β-catenin蛋白表达与正常组织之间有显著性差异(p＜0.05);COX-2在大肠癌、锯齿状腺瘤、非锯齿状腺瘤、正常组织中的阳性表达率分别为90%(18/20例)、100%(10/10例)、70%(7/10例)、0%(0/10例)。大肠癌、锯齿状腺瘤、非锯齿状腺瘤的COX-2蛋白表达与正常组织之间有显著性差异(p＜0.05)。结论:1、p16、hMLH1启动子区CpG岛甲基化是促进大肠癌发生的重要基因事件。2、p16、hMLH1基因甲基化可能与大肠癌Duke分期相关。3、BRAF、β-catenin、COX2蛋白高表达与大肠癌发生相关。4、BRAF蛋白高表达可能是是锯齿状腺瘤的特征性改变。