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目的：在本课题组前期采用cDNA快速末端扩增法（RACE）得到膜蛋白PQ-LRP基因全长序列后，本实验拟构建犬小孢子菌PQ-LRP基因RNA干扰载体，探究RNA干扰载体对犬小孢子菌PQ-LRP基因表达的影响，构建PQ-LRP基因RNA干扰株，为后期探讨此基因在发病机制中的作用提供理论基础及新型药物的开发提供设计靶位。方法：1、提取总RNA，反转录为cDNA作为PCR模板，用引物LRP-F和LRP-R扩增LRP基因的干扰序列，来得到长度为600bp的正向干扰片段，连接到PUC-PUT载体的Ptrpc启动子和间隔序列之间，拟得到中间载体PUC-PLUT；再次用引物LRP-F和LRP-R扩增LRP基因的干扰序列，来得到长度600bp的反向干扰序列连接到PUC-PLUT载体的间隔序列和Ttrpc终止子之间，拟得到中间载体PUC-PLULT，与PCB309进行连接，最终构建出干扰载体PCB309-PLULT。2、根据潮霉素不同浓度对照法，确定筛选犬小孢子菌转化子的潮霉素最佳浓度。3、采用电击法将含有干扰载体PCB309-PLULT的质粒转入根癌农杆菌中，利用根癌农杆菌转化体系对犬小孢子PQ-LRP基因进行沉默。4、应用Real Time PCR方法检测PCB309-PLULT载体对犬小孢子菌PQ-LRP基因表达的干扰作用。结果：构建了中间载体PUC-PLUT、PUC-PLULT，并通过PCR、基因测序进行鉴定；成功构建了长为8825bp的干扰载体PCB309-PLULT，并通过酶切测定为该目的载体；筛选出犬小孢子菌转化子的潮霉素最佳浓度为300μg/ml；用实时定量PCR方法对犬小孢子菌干扰前后进行鉴定：以干扰前PQ-LRP相对表达量1.0为标准，干扰后PQ-LRP相对表达量为0.39，干扰后下调61%。结论：成功构建的干扰载体PCB309-PLULT可以明显抑制犬小孢子菌PQ-LRP基因的表达，并成功构建了PQ-LRP基因干扰株，为研究膜蛋白PQ-LRP基因在犬小孢子菌致病中的功能奠定基础。