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目的：细胞凋亡与肿瘤的发生发展密切相关，凋亡抑制蛋白是导致化疗耐药的主要原因，在卵巢癌中主要的凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis protein，IAPs)是XIAP、cIAP2和Survivin。核因子(NF-κB)是重要的调节细胞增殖和凋亡的转录因子，可调节凋亡抑制蛋白家族(IAPs)成员cIAP2、XIAP等表达。但是在卵巢癌中XIAP、NF-κB、以及cIAP2三者之间的关系尚未见报道，本实验运用RNA干扰技术沉默卵巢癌细胞株SKOV-3的XIAP基因后，观察细胞凋亡以及cIAP2、NF-κB的变化，探讨XIAP表达水平与cIAP2和NF-κB表达水平之间的关系，为卵巢癌的基因治疗的策略选择奠定基础。
方法：研究对象为人卵巢癌细胞系(SKOV-3)。(1)针对XIAP的siRNA设计和选择。(2)用RPMI-1640培养基培养卵巢癌(SKOV-3)细胞。(3)通过脂质体将XIAPFAM-siRNA转染进入卵巢癌(SKOV-3)细胞，流式细胞仪分别检测不同浓度50nmol、100nmol、200nmol的转染率。(4)用转染率最高的转染浓度转染细胞，实验分组：空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染XIAP-siRNA组(XIAP-siRNA)，48小时后收集各组细胞用MTT法检测各组细胞的增值率。(5)AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率。(6)实时荧光定量PCR检测各组细胞XIAPmRNA、cIAP2mRNA、NF-κBP65mRNA的相对表达量。(7)Western Blot检测各组细胞XIAP、cIAP2、NF-κB P65蛋白表达情况。
结果：(1)XIAPFAM-siRNA转染细胞后流式细胞仪检测三个浓度50nmol、100nmol、200nmol的转染率分别为50％、51.42％、75.66％。(2)用转染率最高的浓度XIAP-siRNA200nmol转染卵巢癌细胞，48小时后收集各个组的细胞，MTT法检测各组卵巢癌细胞增值率的变化，空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间细胞增值率分别是100±0、93.00±0.01、93.31±0.02、45.34±0.01，转染XIAP-siRNA组的细胞增值率明显低于空白对照组细胞增值率和脂质体组细胞增值率以及非特异干扰组细胞增值率，其差异有统计学意义，(P<0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间细胞增值率，其差异无统计学意义，(P>0.05)。(3)AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率，结果显示：空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染XIAP-siRNA组的凋亡率分别是3.42％、5.12％、6.28％、27.58％。转染XIAP-siRNA组凋亡率明显高于空白对照组、脂质体组、非特异干扰组的凋亡率，其差异有统计学意义，(P<0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间凋亡率，其差异无统计学意义，(P>0.05)。(4)实时荧光定量PCR检测各组细胞XIAP mRNA、cIAP2mRNA、NF-κBP65 mRNA的相对表达量，结果显示：空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染XIAP-siRNA组的XIAP mRNA相对表达含量分别为167.38±56.58、163.63±61.06、160.88±38.39、48.78±20.08，转染XIAP-siRNh组XIAP mRNA表达含量明显低于空白对照组、脂质体组、非特异干扰组XIAPmRNA表达含量，其差异有统计学意义，(P<0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间XIAP mRNA表达含量，其差异无统计学意义，(P>0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染XIAP-siRNA组的NF-κBPB5mRNA相对表达含量分别为507.06±111.73、512.75±96.54、488.02±118.42、281.02±71.43，转染XIAP-siRNA组NF-κBP65mRNA表达含量明显低于空白对照组、脂质体组、非特异干扰组NF-κBP65mRNA表达含量，其差异有统计学意义，(P<0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间NF-κBP65mRNA表达含量，其差异无统计学意义，(P>0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染XIAP-siRNA组的cIAP2mRNA相对表达含量分别为242.93±106.05、238.80±88.27、227.76±19.14、129.10±52.95。转染XIAP-siRNA组cIAP2mRNA表达含量明显低于空白对照组、脂质体组、非特异干扰组NF-κBP65mRNA表达含量，其差异有统计学意义，(P<0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间cIAP2mRNA表达含量，其差异无统计学意义，(P>0.05)。(5)Western Blot检测各组细胞蛋白表达量结果：空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染XIAP-siRNA组的XIAP蛋白相对表达含量分别是48.37±1.56、42.56±1.3844.75±1.15、19.28±1.23。转染XIAP-siRNA组XIAP蛋白表达量明显低于空白对照组、脂质体组、非特异干扰组XIAP蛋白表达含量，其差异有统计学意义，(P<0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间XIAP蛋白表达量，其差异无统计学意义，(P>0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染XIAP-siRNA组NF-κBP65蛋白相对表达含量分别是9.18±0.23、10.73±0.36、9.12±0.15、3.85±0.10。转染XIAP-siRNA组NF-κBP65蛋白表达量明显低于空白对照组、脂质体组、非特异干扰组NF-κBP65蛋白表达含量，其差异有统计学意义，(P<0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间蛋白表达量，其差异无统计学意义，(P>0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组、转染XIAP-siRNA组cIAP2蛋白相对表达含量分别是7.21±0.12、6.95±0.20、6.75±0.11、2.21±0.03。转染XIAP-siRNA组cIAP2蛋白表达量明显低于空白对照组、脂质体组、非特异干扰组cIAP2蛋白表达含量，其差异有统计学意义，(P<0.05)。空白对照组、脂质体组、非特异干扰组之间cIAP2蛋白表达量，其差异无统计学意义，(P>0.05)。
结论：siRNA沉默XIAP后XIAP的表达量下降，使卵巢癌细胞(SKOV-3)增殖减少，细胞凋亡增加。siRNA沉默XIAP后NF-κBmRNA、cIAP2mRNA，蛋白水平的表达量均减少，可见在卵巢癌细胞中XIAP的表达与cIAP2和NF-κB有联系，为卵巢癌的治疗靶位点提供新的线索。