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第一部分:CD80、CD86、OX-62及MHC-Ⅱ在大鼠COPD肺泡灌洗液及外周血中的表达目的:探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺泡灌洗液(BALF)及外周血中树突状细胞(DCs)表面分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ和0X-62的差异表达。方法:选取雄性SPF级Wistar大鼠共74只随机分为三组:正常对照组(n=24)、COPD模型组(n=40)和戒烟组(n=10)。COPD模型组大鼠第1、15天气道内注入200ug/200ul脂多糖(LPS)溶液,第2-28天(第15天除外)连续每天被动吸烟2次,30min×12支/次;戒烟组大鼠造模方法同COPD模型组,第29天至42天不加任何干预措施。第7天、14天、21天及28天分别随机选取正常组大鼠6只、COPD组大鼠6只,第42天取戒烟组大鼠6只。大鼠肺组织石蜡包埋HE染色观察大鼠肺组织病理学改变,流式细胞技术(FCM)检测COPD组和正常对照组大鼠BALF及外周血中DCs表面的细胞因子CD80、CD86、OX-62及MHC-Ⅱ的表达量。结果:第7天、14天、21天及28天肺组织病理HE染色显示气道炎症和肺气肿表现,第28天出现明显肺气肿表现,第42天与28天无明显差别。模型组大鼠外周血中CD80、CD86及0X-62百分比较正常对照组增加,差异有统计学意义(p<0.01,p<0.05,p<0.001), MHC-Ⅱ百分比较对照组减少,差异有统计学意义(p<0.01)。COPD模型组大鼠BALF中CD80及CD86百分比较正常对照组增加,差异有统计学意义(p<0.05,p<0.05),0X-62及MHC-Ⅱ百分比与正常对照组差异无统计学意义(p>0.05)。正常对照组与COPD模型组中CD80、CD86、OX-62及MHC-Ⅱ在BALF和外周血中的变化无相关性。结论:COPD大鼠第28天病理表现已符合人类的特征性改变,提示COPD大鼠模型成功建立,且较稳定。COPD模型组大鼠外周血及BALF中DCs数量增加,提示DCs在肺内的募集可能参与了COPD的炎症反应过程。第二部分:DCs及CCL20在大鼠COPD发病机制中的作用研究目的:通过CCL20单克隆抗体干预COPD模型组大鼠疾病进展,制备CCL20抑制组模型,研究DCs及CC亚族趋化因子配体20(CCL20)在CCL20抑制组和COPD组大鼠BALF及外周血中的变化,进一步探讨DCs在COPD发病机制中的作用及CCL20在其中所起的作用。方法:选取雄性SPF级Wistar大鼠共26只随机分为三组:正常对照组(n=6),COPD模型组(n=10)和CCL20抑制组(n=10)。COPD模型组及CCL20抑制组大鼠第1、15天气道内注入200ug/200ulLPS溶液,第2-28天(第15天除外)连续每天被动吸烟2次,30min×12支/次,另CCL20抑制组大鼠第1天注LPS前腹腔注射CCL20单克隆抗体(100μg/只);正常对照组大鼠正常喂养,不加任何干预措施。取大鼠肺组织石蜡包埋HE染色观察肺组织病理学改变,酶联免疫法(ELISA)检测BALF及外周血中CCL20的含量,FCM检测BALF及外周血中DCs各细胞因子的变化。结果:CCL20抑制组大鼠外周血中CCL20的含量高于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.001),与COPD组差异无统计学意义(p>0.05);BALF中CCL20含量高于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.05),低于COPD组,差异有统计学意义(p<0.05)。外周血中,CCL20抑制组大鼠CD80百分比高于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.05),与COPD组差异无统计学意义(p>0.05);CD86及0X-62百分比与正常对照组差异无统计学意义(p>0.05),低于COPD组,差异有统计学意义(p<0.05,p<0.001);MHC-Ⅱ百分比低于正常对照组,差异有显著统计学意义(p<0.01),与COPD组差异无统计学意义(p>0.05)。BALF中,CCL20抑制组大鼠CD80百分比高于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.01),低于COPD组,差异有统计学意义(p<0.05);CD86百分比高于正常对照组,差异有显著统计学意义(p<0.001),与COPD组差异无统计学意义(p>0.05);MHC-Ⅱ及0X-62百分比与正常对照组差异无统计学意义(p>0.05),与COPD组差异无统计学意义(p>0.05)。正常对照组、COPD模型组及CCL20抑制组中CD80、CD86、OX-62及MHC-Ⅱ在BALF和外周血中的变化无相关性,CCL20抑制组中CCL20在BALF和外周血中的含量变化呈正相关关系。结论:CCL20抑制组CCL20的含量在外周血中较正常组的增多,BALF中较正常组的增多和较COPD组的减少,提示CCL20参与了COPD的发病过程,CCL20抗体对该发病过程可能有一定的抑制作用。CCL20抑制组外周血中CD86和0X-62百分比较COPD组减少,在BALF中CD80百分比较COPD组减少,但较正常组增加,提示CCL20抗体可以减轻DCs在外周血中的增长和气道内的募集,使COPD气道内DCs的增加得到一定程度的抑制,有助于减轻COPD的全身炎症反应。