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目的:通过给予ApoE-/-小鼠高脂饮食建立动脉粥样硬化模型,同时用多个超声指标动态评价动脉粥样硬化进程并尝试观察动脉粥样硬化模型的肠道菌群改变。
方法:将28只ApoE-/-小鼠随机分为模型组(24只)和对照组(10只),模型组采用高脂饲料喂养,对照组予普通饲料喂养。分别于喂养第0周、4周、8周、12周、16周称重并尾静脉采血测量每个小鼠血清中的血糖和总胆固醇含量,同时用Vevo2100超高分辨率小动物超声成像系统和MS-400探头测量腹主动脉的收缩期峰值流速(PSV)、舒张末期流速(EDV)、加速时间(AT)、收缩期时间(ST)、舒张期时间(DT)、无名动脉及升主动脉的收缩期管径(Ds)、舒张期管径(Dd)及管壁厚度,并计算腹主动脉阻力指数(RI)、收缩期时间/舒张期时间(ST/DT)、加速时间/总时间(AT/T)、无名动脉及升主动脉相对膨胀值(relD),并在二维超声上观察小鼠动脉粥样硬化斑块的形成情况及肝脏和肾皮质的回声强度。实验结束时处死小鼠,下腔静脉采血进行血脂测定(低密度脂蛋白胆固醇LDL-C、高密度脂蛋白胆固醇HDL-C、极低密度脂蛋白胆固醇VLDL-C)评估动脉粥样硬化程度。取主动脉全程血管行苏丹IV染色,评估斑块面积。取主动脉根部血管、肝脏、肾脏、心脏及末端直肠和盲肠进行HE染色观察其组织病理学特点,并收集粪便对其中的16S核糖体核糖核酸(rRNA)基因进行测序,分析各组小鼠肠道微生物的种类及多样性,并观察其差异性。
结果:1.超声显示,随周龄增长,腹主动脉舒张末期流速逐渐降低,模型组与对照组在8周开始有统计学差异(P<0.05),收缩期时间/舒张期时间逐渐升高,模型组与对照组在12周有统计学差异(P<0.05)。升主动脉及无名动脉的管壁厚度、收缩期管径及舒张期管径逐渐增加,相对膨胀值逐渐降低,模型组与对照组分别在8周末、12周末与对照组有统计学差异(P<0.05)。随周龄增加二维超声上肝脏的回声逐渐增强,在4周末模型组部分小鼠肝脏回声相当或超过肾皮质回声,呈脂肪肝声像图改变,在8周末首次在部分模型组小鼠的主动脉根部看到动脉粥样硬化斑块形成。
2.实验结束时,模型组及对照组比较,血清TC、VLDL-C和LDL-C显著升高(P<0.05),HDL-C显著降低(P<0.05)。
3.实验结束时,直视条件下模型组主动脉血管段可见大量白色斑块形成,苏丹IV染色后见明显红染。图像分析软件显示模型组的的斑块大小明显高于对照组。主动脉根部HE染色可见斑块内泡沫细胞和脂质沉积,肝脏HE染色可见显著的脂肪空泡,证实ApoE-/-小鼠结合高脂饮食可形成明显的动脉粥样硬化病理改变。
4.小鼠的肠道菌群受高脂饮食的调节,高脂饮食显著降低了肠道菌群的多样性。模型组与对照组相比,在门水平上,厚壁菌门增加,拟杆菌门和变形菌门减少,并新增了疣微菌门和放线菌门。在种水平上新增了罗伊氏乳杆菌、gnavus瘤胃球菌和大肠杆菌,消失了脱硫弧菌C21-C20。
结论:1.高脂饲料搭配基因敲除可在8-12周成功地建立动脉粥样硬化模型。
2.超声可简单、无创的监测动脉粥样硬化小鼠模型的建立,舒张末期流速、收缩期/舒张期时间、收缩期、舒张期管径、相对膨胀值及肝脏回声强度可望成为早期诊断动脉粥样硬化的一个有效指标。
3.高脂饮食显著降低了肠道菌群的多样性,放线菌门和疣微菌门的减少,拟杆菌门增加,厚壁菌门减少可能起到抑制动脉粥样硬化进展的正向作用。
方法:将28只ApoE-/-小鼠随机分为模型组(24只)和对照组(10只),模型组采用高脂饲料喂养,对照组予普通饲料喂养。分别于喂养第0周、4周、8周、12周、16周称重并尾静脉采血测量每个小鼠血清中的血糖和总胆固醇含量,同时用Vevo2100超高分辨率小动物超声成像系统和MS-400探头测量腹主动脉的收缩期峰值流速(PSV)、舒张末期流速(EDV)、加速时间(AT)、收缩期时间(ST)、舒张期时间(DT)、无名动脉及升主动脉的收缩期管径(Ds)、舒张期管径(Dd)及管壁厚度,并计算腹主动脉阻力指数(RI)、收缩期时间/舒张期时间(ST/DT)、加速时间/总时间(AT/T)、无名动脉及升主动脉相对膨胀值(relD),并在二维超声上观察小鼠动脉粥样硬化斑块的形成情况及肝脏和肾皮质的回声强度。实验结束时处死小鼠,下腔静脉采血进行血脂测定(低密度脂蛋白胆固醇LDL-C、高密度脂蛋白胆固醇HDL-C、极低密度脂蛋白胆固醇VLDL-C)评估动脉粥样硬化程度。取主动脉全程血管行苏丹IV染色,评估斑块面积。取主动脉根部血管、肝脏、肾脏、心脏及末端直肠和盲肠进行HE染色观察其组织病理学特点,并收集粪便对其中的16S核糖体核糖核酸(rRNA)基因进行测序,分析各组小鼠肠道微生物的种类及多样性,并观察其差异性。
结果:1.超声显示,随周龄增长,腹主动脉舒张末期流速逐渐降低,模型组与对照组在8周开始有统计学差异(P<0.05),收缩期时间/舒张期时间逐渐升高,模型组与对照组在12周有统计学差异(P<0.05)。升主动脉及无名动脉的管壁厚度、收缩期管径及舒张期管径逐渐增加,相对膨胀值逐渐降低,模型组与对照组分别在8周末、12周末与对照组有统计学差异(P<0.05)。随周龄增加二维超声上肝脏的回声逐渐增强,在4周末模型组部分小鼠肝脏回声相当或超过肾皮质回声,呈脂肪肝声像图改变,在8周末首次在部分模型组小鼠的主动脉根部看到动脉粥样硬化斑块形成。
2.实验结束时,模型组及对照组比较,血清TC、VLDL-C和LDL-C显著升高(P<0.05),HDL-C显著降低(P<0.05)。
3.实验结束时,直视条件下模型组主动脉血管段可见大量白色斑块形成,苏丹IV染色后见明显红染。图像分析软件显示模型组的的斑块大小明显高于对照组。主动脉根部HE染色可见斑块内泡沫细胞和脂质沉积,肝脏HE染色可见显著的脂肪空泡,证实ApoE-/-小鼠结合高脂饮食可形成明显的动脉粥样硬化病理改变。
4.小鼠的肠道菌群受高脂饮食的调节,高脂饮食显著降低了肠道菌群的多样性。模型组与对照组相比,在门水平上,厚壁菌门增加,拟杆菌门和变形菌门减少,并新增了疣微菌门和放线菌门。在种水平上新增了罗伊氏乳杆菌、gnavus瘤胃球菌和大肠杆菌,消失了脱硫弧菌C21-C20。
结论:1.高脂饲料搭配基因敲除可在8-12周成功地建立动脉粥样硬化模型。
2.超声可简单、无创的监测动脉粥样硬化小鼠模型的建立,舒张末期流速、收缩期/舒张期时间、收缩期、舒张期管径、相对膨胀值及肝脏回声强度可望成为早期诊断动脉粥样硬化的一个有效指标。
3.高脂饮食显著降低了肠道菌群的多样性,放线菌门和疣微菌门的减少,拟杆菌门增加,厚壁菌门减少可能起到抑制动脉粥样硬化进展的正向作用。