论文部分内容阅读
目的：本实验采取皮下多点注射异丙肾上腺素制作心肌纤维化模型，观察不同剂量参附芎泽方对心肌纤维化模型大鼠的干预效应，从TGF-β/Smads通路初步揭示参附芎泽方的作用机制，为参附芎泽方的临床应用提供实验依据。 方法：60只SD大鼠适应性饲养1周后，随机分为5组：空白组（CON）8只、模型组（MOD）13只、参附芎泽低剂量组（SFXZL）13只、参附芎泽中剂量组（SFXZM）13只、参附芎泽高剂量组（SFXZH）13只。MOD组、SFXZL组、SFXZM组及SFXZH组首先皆以20、10、5 mg·kg-1·d-1递减3日，然后连续7日3 mg·kg-1·d-1的方法皮下多点注射异丙肾上腺素制作心肌纤维化模型，CON组同位置等剂量注射生理盐水10日。大鼠造模结束后第1天，SFXZL组给予含1.6 g/ml生药量药液，SFXZM组给予含3.2 g/ml生药量药液，SFXZH组给予含6.4 g/ml生药量药液，三组均以10 ml/kg的剂量灌胃给药，CON组及MOD组给予等剂量生理盐水灌胃，一天1次，连续4周。末次灌药24小时后，采用BL-420A生物机能实验系统记录大鼠血流动力学参数后，取心肌组织，分别行心肌HYP检测、HE染色、Masson染色、免疫组织化学法检测TGF-β1、Smad2/3及Western blot法检测心肌TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达。 结果： 1.血流动力学检测。与CON组相比较：MOD组大鼠HR、LVEDP明显升高，LVSP与±dp/dt max明显降低。与MOD相比较：SFXZH组HR降低，SFXZL、SFXZM组无明显差异；参附芎泽各剂量组LVEDP显著降低，LVSP、±dp/dt max均明显升高。与SFXZL组相比较：SFXZM组LVEDP降低，LVSP、±dp/dt max升高；SFXZH组LVEDP显著降低，LVSP、±dp/dt max显著升高。 2.心肌HYP检测。与CON组相比较：MOD组心肌组织HYP显著增高。与MOD组相比较：参附芎泽各剂量组心肌HYP表达均显著降低。与SFXZL相比：SFXZM组、SFXZH组心肌HYP表达水平减少。 3.心肌病理学变化。HE染色：CON组大鼠心肌细胞无萎缩、无肿胀；MOD组大鼠纤维排列紊乱，心肌组织受损严重；给予不同剂量参附芎泽方4周后，参附芎泽各剂量组大鼠纤维化程度明显降低。Masson染色：CON组大鼠仅见少量胶原纤维，胶原容积分数（CVF）低；MOD组大鼠可见大量胶原纤维增生，CVF较CON组差异显著；给药后，参附芎泽各剂量组较MOD组纤维化程度减轻，CVF明显下降；与SFXZL组相比，SFXZM组与SFXZH组心肌CVF呈不同程度降低。 4.免疫组织化学染色。MOD组心肌组织中TGF-β1、Smad2/3的表达较CON组增多。参附芎泽各剂量组与MOD组相比较，TGF-β1、Smad2/3的表达呈不同程度的降低。与SFXZL组比较，SFXZM组TGF-β1、Smad2/3表达降低；SFXZH组TGF-β1、Smad2/3表达量显著降低。 5.Western-blot检测。MOD组与CON组相比较，心肌组织中TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的表达增加。参附芎泽各剂量组与MOD组相比较， TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的表达呈不同程度降低。与SFXZL组相比较：SFXZM组TGF-β1降低，Smad2/3、p-Smad2/3明显降低；SFXZH组TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的表达均显著降低。 结论：实验结果表明参附芎泽方可改善心肌纤维化大鼠心功能，降低心肌胶原纤维沉积，抑制心肌纤维化，其机制可能与下调TGF-β/Smads信号通路中相关分子蛋白表达有关。