论文部分内容阅读
脂质体具有良好的生物相容性,可包封从水溶性至脂溶性的一系列药物,体内注射给药具有靶向性,可提高药物的治疗指数,并降低药物毒性,因此在药物递送领域得到了广泛的应用。然而,由于脂质体结构本身存在的缺陷(内部为液态,磷脂双分子层膜流动性强,脂质体易变形、破裂),导致脂质体存在固有的不稳定性,对其体内过程造成不利的影响。本文拟从脂质体的内部入手,采用内部胶凝化的策略使脂质体内核趋向于“固化”,降低内核液体的流动性,增强脂质体膜的刚性,提高脂质体的稳定性,延缓水溶性药物从脂质体中的释放以达到改善脂质体物理化学性质的目的。以小分子抗肿瘤药物阿糖胞苷(cytarabine, Ara-C)为模型药物,以泊洛沙姆407/188为热敏凝胶材料,设计制备内部胶凝化的脂质体,以期克服普通脂质体所固有的缺陷。通过对内部胶凝化脂质体的表征、体外释放试验、药动学和体内外分布评价,探讨脂质体内部胶凝化对脂质体体内外行为的可能影响。内部胶凝化脂质体保留了脂质体膜的可修饰性,本文以PEG2000-DSPE对其进行长循环修饰,并进行了体内外初步评价。本文首先设计制备了内部胶凝化脂质体,对其体外性质进行详细考察,对内部胶凝化脂质体的细胞学和生物学行为进行了评价,最后对表面修饰内部胶凝化脂质体进行了初步的研究。采用搅拌子法和粘度法测定了P407/P188凝胶体系的胶凝温度。结果表明两种方法所得胶凝温度结果误差均较小,重复性良好。P407/P188(18%/10%)的poloxamer体系具有较适宜的胶凝温度,拟用于下一步胶凝脂质体的研究。采用薄膜分散法制备了内部胶凝化脂质体(gelliposome, GL)。采用透射电子显微镜观察了内部胶凝化脂质体的形态。采用荧光显微镜观察内部胶凝化脂质体,用TritonX-100将脂质膜破坏,观察脂质体的形态变化和荧光的分布情况,证实了脂质膜破坏后凝胶内核依然存在,据此确认脂质体内部胶凝化现象。采用热台显微镜和羧基荧光素荧光指示剂法测定了内部胶凝化脂质体的内部胶凝温度,结果表明在体胶凝温度与poloxamer整体凝胶的胶凝温度相似。以阿糖胞苷(Arabinocytidine, Ara-C)作为模型药物制备了内部胶凝化脂质体,对影响包封率、载药量、粒径、表面电位的因素进行了系统的考察,并优选了处方用于进一步的体内外研究。考察了阿糖胞苷内部胶凝化脂质体(Ara-C gelliposome, Ara-C-GL)和普通脂质体(Ara-C conventional liposomes, Ara-C-CL)在4℃、25℃和37℃溶液中的泄漏率,结果表明,在这三种温度下Ara-C-GL的泄漏率均明显低于Ara-C-CL,有较好的稳定性。考察了Ara-C-GL和Ara-C-CL在37℃下血浆中的泄漏率,结果表明,Ara-C-GL在血浆中的泄漏率明显低于Ara-C-CL,并且Ara-C-GL内部凝胶溶液浓度越高,泄漏率越低。考察了25℃和37℃下破坏剂TritonX-100的加入对Ara-C-GL和Ara-C-CL的破坏作用,结果表明,在两种实验温度下,对于加入同样浓度的TritonX-100溶液,Ara-C-CL的荧光释放百分比均明显高于Ara-C-GL,表明Ara-C-GL对破坏剂有较好的耐受能力。采用流通池法测定Ara-C-CL的体外释放并考察了影响释放的因素。对流速的考察结果表明,随着流速的增加,Ara-C-GL的释放加快,释放量增加。与Ara-C-CL相比,Ara-C-GL释放初期快于Ara-C-CL,后期总体释放显著慢于Ara-C-CL,表现出较好的缓释效果。磷脂和胆固醇比例对Ara-C-GL的释放考察结果表明胆固醇的用量会影响脂质膜的刚性从而影响Ara-C-GL的释放。Ara-C-GL的大鼠体内药动学研究表明：与溶液组和普通脂质体组相比,Ara-C-GL在大鼠体内的滞留时间明显延长,消除明显减慢,具有一定的缓释效果。Ara-C-GL的小鼠组织分布结果表明：与溶液组和普通脂质体组相比,Ara-C-GL在大多数脏器的蓄积较多,消除较慢,能显著延长体内作用时间。采用与Ara-C-GL相似的方法制备了阿糖胞苷长循环内部胶凝化脂质体(long circulating Ara-C gelliposome, PEG2000-DSPE modified Ara-C gelliposome, PEG-Ara-C-GL)。大鼠药动学结果表明：PEG-Ara-C-GL的体内血药浓度明显高于Ara-C-GL。小鼠体内组织分布研究结果表明：PEG-Ara-C-GL的各组织药物摄取量明显低于Ara-C-GL,说明将凝胶溶液作为脂质体的内核制备成内部胶凝化脂质体后,仍能保持脂质体的可修饰性,长循环材料修饰内部胶凝化脂质体后,成功地避免了组织中的摄取,增加了血中药物浓度,脂质体内部胶凝化对其体内行为有一定的影响。本文成功地将热敏型poloxamer凝胶溶液作为脂质体的内核,制备了内部胶凝化脂质体,采用小分子水溶性药物Ara-C作为模型药物制备并优化了Ara-C-GL的处方。Ara-C-GL和Ara-C-CL稳定性的考察结果表明,Ara-C-GL在各种条件下的泄漏均明显低于Ara-C-CL,具有良好的稳定性。药物从载体的体内外释放结果表明Ara-C-GL具有较好的缓释效果。本文所建立的内部胶凝化脂质体保持了脂质体的可修饰性,将PEG2000-DSPE用来修饰内部胶凝化脂质体制备长循环内部胶凝化脂质体,达到了长循环作用。体内外试验结果表明,脂质体内部胶凝化对脂质体的体内外行为有较大的影响,该作用有可能在延缓药物释放,改善其药动学及组织分布方面具有应用潜力。