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鼠伤寒沙门菌是一种能够在体内多种组织定植的胞内侵袭性细菌。经消化道感染的鼠伤寒沙门菌可寄居在肝脏、肾脏、淋巴结和肺脏等组织器官，这种特性决定了鼠伤寒沙门菌可作为理想的外源基因的转运系统，经减毒的鼠伤寒沙门菌可作为理想的质粒DNA运载载体。 人α-防御素-3（HNP-3）是一种阳离子抗菌肽，存在于哺乳动物的大部分组织器官中，是机体先天性免疫的重要组成部分。HNP-3抗菌谱广，对多数革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、寄生虫以及包膜病毒等都有较强的杀灭作用。因此，针对HNP-3开展分子结构和功能相关性研究具有重要的意义。 本实验根据HNP-3的编码序列设计3对引物，分别扩增HNP-3的原前体肽（prepro-HNP-3）、前体肽（pro-HNP-3）和成熟肽（HNP-3）基因片段，构建原前体肽和成熟肽真核表达载体 pcDNA(prepro-HNP-3)和 pcDNA(HNP-3)及前体肽原核表达载体 PYA(pro-HNP-3)。然后将重组真核表达载体 pcDNA(prepro-HNP-3)和 pcDNA(HNP-3)电转化导入减毒沙门菌ΔcrpSL1344，重组原核表达载体 PYA(pro-HNP-3)电转化入减毒沙门菌ΔcrpΔasdSL1344，构建重组菌?crpSL1344(pcDNA-propre-HNP-3)、?crpSL1344(pcDNA-HNP-3)和?crp?asdSL1344(PYA-pro-HNP-3)。重组菌分别转染体外培养的 BHK细胞， Tricine-SDS-PAGE和Western bloting检测prepro-HNP-3、HNP-3和pro-HNP-3蛋白表达情况，ELISA检测其表达水平，琼脂板扩散法检测表达的 prepro-HNP-3、HNP-3和 pro-HNP-3的抗菌活性；在此基础上，重组菌分别接种昆明白小鼠，于接种后第10 d用沙门菌SL1344标准毒株和野生型大肠杆菌进行攻毒保护性试验。结果显示：重组菌ΔcrpSL1344(pcDNA-prepro-HNP-3)、ΔcrpSL1344(pcDNA-HNP-3)和Δcrp?asdSL1344(PYA-pro-HNP-3)在 BHK细胞中分别有10.0kDa、3.6kDa和8.0kDa的蛋白表达，Western blotting表明表达的蛋白分别为prepro-HNP-3、HNP-3和pro-HNP-3；ELISA检测各转染组转染96 h后细胞上清的的表达量分别为264ng/mL、136 ng/mL和102 ng/mL，细胞裂解液的表达量分别为145ng·/mL·106个细胞、189 ng/mL·106个细胞和148 ng/mL·106个细胞。琼脂板扩散抑菌法表明转染三种重组菌后浓缩的细胞上清和细胞裂解液均有一定的抗菌效果。表达的蛋白以 HNP-3蛋白抗菌活性最高，prepro-HNP-3次之，pro-HNP-3活性最低；攻毒保护实验结果表明，攻毒 SL1344标准毒株组后，以接种重组菌ΔcrpSL1344(pcDNA-HNP-3)所产生的保护力最强，为87.5％，重组菌ΔcrpSL1344(pcDNA-prepro-HNP-3)保护力为75%，ΔcrpΔasdSL1344(PYA-pro-HNP-3)为62.5%。攻毒野生型大肠杆菌后，重组菌ΔcrpSL1344(pcDNA-HNP-3)所产生的保护力为75%，ΔcrpSL1344(pcDNA-prepro-HNP-3)为50%，ΔcrpΔasdSL1344(PYA-pro-HNP-3)为37.5%，表明重组菌接种动物对两种病原菌均具有良好的抵抗力。攻毒后对实验组小鼠体增重的影响结果表明，和空白对照组相比，ΔcrpSL1344(pcDNA-HNP-3)接种组攻毒后小鼠体重差异不明显（P>0.05)，真核重组菌ΔcrpSL1344(pcDNA-propre-HNP-3)接种组攻毒后小鼠体重差异显著（P<0.05）原核重组菌ΔcrpΔcyaΔasdSL1344(PYA-pro-HNP-3)接种组攻毒后小鼠体重差异极显著（P<0.01）。 研究结果表明：减毒的鼠伤寒沙门氏菌能够介导原核和真核表达质粒在体内、外真核细胞内表达出具有活性的HNP-3蛋白,且 HNP-3成熟肽具有较高的抗菌活性；在 BHK中，携带真核质粒的重组菌表达的 prepro-HNP-3蛋白大部分被分泌到细胞外，但体外培养的 BHK细胞不能对 prepro-HNP-3蛋白进行剪切形成成熟的 HNP-3成熟肽；真核细胞能够对原核表达载体表达的pro-HNP-3进行初步加工，修饰成具有功能的蛋白质。本实验为减毒沙门菌作为活载体和 HNP-3结构与功能的相关研究提供了理论和技术材料。