脂肪酶催化制备功能性微藻磷脂的研究

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溶血磷脂对于解决与膜相关的化学和生物化学问题至关重要。近年来,研究表明溶血磷脂在生理学与病理学方面发挥着重要作用,如炎症、繁殖、血管新生、肿瘤、动脉粥样硬化和神经系统调节。人体摄入n-3多不饱和脂肪酸能够预防和治疗慢性炎症、肥胖、糖尿病和癌症。此外,研究还表明,富含n-3 PUFAs的溶血磷脂能够防止血管功能紊乱和单核细胞粘附等功能。当前,制备溶血磷脂的方法有化学法和酶催化法。与化学法相比,酶催化法具有高选择性和特异性、反应条件温和、副产物少等优点。因此,酶催化制备溶血磷脂是研究油脂改性的一个热门方向。酶催化制备溶血磷脂的方法包括水解反应和/或醇解反应。目前,市场上流通的磷脂产品主要来源于大豆和蛋黄。与前两者相比,海洋微藻如微拟球藻具有生长速度快,油脂含量高和EPA含量丰富等优点。因此,本论文使用脂肪酶作为生物催化剂,以微拟球藻磷脂为底物,对其工艺参数进行优化,为工业化生产溶血磷脂和结构磷脂提供理论基础。具体内容如下:1.以4种商用脂肪酶(Lipozyme TL IM、Novozym 435、Lipozyme RM IM和CAL-A)作为催化剂进行筛选,探讨以微藻磷脂为原料制备溶血磷脂的影响因素,确定最佳工艺条件。结果表明:Lipozyme TL IM为最佳催化剂,最适工艺条件为:磷酸盐缓冲液与磷脂体积质量比2:0.1(v/w),酶量8%(基于磷脂量),反应温度45℃,反应时间14 h,磷酸盐缓冲液pH7,在该条件下水解程度达到最大值42.4%。2.以脂肪酶Lipozyme TL IM为催化剂,乙醇为溶剂,探讨脂肪酶催化磷脂水解与醇解的差异性,并得到醇解最佳工艺条件:醇油质量比3:1,含水量10%(基于底物总量),酶量22%(基于磷脂量),反应温度35℃,反应时间8 h,在此条件下,醇解率达到75.1%,醇解效果明显高于水解效果。3.脂肪酶催化醇解制备溶血磷脂及n-3多不饱和脂肪酸回收,通过酶的筛选,得出脂肪酶Novozym 435的催化效果最好。在此基础上,探究固定化酶与液体酶对催化醇解效率的影响,以固定化脂肪酶Novozym 435和液体脂肪酶CAL-B为催化剂,确定各自的最佳工艺条件。固态脂肪酶Novozym 435:醇油质量比9:1,含水量2%(基于底物总量),酶量15%(基于磷脂量),反应温度40℃,反应时间12 h,在此条件下,醇解率达到98.3%,n-3PUFAs回收率达到83.3%。液体脂肪酶CAL-B:醇油比1:0.1(乙醇与磷脂的体积质量比,v/w),含水量0%(基于底物总量),酶量1.2%(基于磷脂量),反应温度50℃,反应时间12 h,在此条件下,醇解率达到74.2%,n-3PUFAs回收率达到92.8%。4.以4种商用脂肪酶(Lipozyme TL IM、Novozym 435、Lipozyme RM IM和CAL-A)作为生物催化剂,以微藻磷脂和辛酸为底物,通过酸解反应制备富含辛酸的结构磷脂。结果表明:Lipozyme TL IM的催化效果最好。Lipozyme TL IM催化生成富含辛酸结构脂的最适反应条件为:酶载量为10%,辛酸与磷脂的摩尔比为6:1,反应温度50℃,含水量10%,反应时间24 h,在此体系下,辛酸嵌合率为31.6%。
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