弓形虫是一种专性胞内寄生的顶复门原虫,几乎能在所有恒温动物(鸟和哺乳动物)的有核细胞内建立感染,由其引起的弓形虫病在世界范围内广泛分布与流行。近年来,随着免疫缺陷型患者的增多,弓形虫病的发病率也呈不断上升趋势。弓形虫入侵宿主细胞时在虫体与宿主细胞膜接触处形成移动联接复合物(MJ)来帮助虫体锚定于宿主细胞表面并帮助虫体完成入侵过程。目前已知的MJ复合物成员棒状体颈部蛋白(RON)2,4,5的功能已有相应的研究报道,但其间蛋白的相互作用模式还尚不清楚。其中TgRON4作为入侵的关键分子,已有研究表明敲除该分子影响虫株入侵率但并不致死。通过同源性比对,我们找到TgRON4的同源基因TgRON4L1,探究其在TgRON4缺失时是否对虫体入侵起到一定的补偿作用。本研究根据弓形虫基因组数据库ToxoDB中TgRON4L1的基因序列的分析结果,截短部分序列进行扩增,原核表达制备了 TgRON4L1的多克隆抗体,检测到TgRON4L1在虫体入侵时定位于移动联接复合物上。体外真核细胞表达移动联接复合物成员TgRON4和同系物TgRON4L1以及TgRON5,通过免疫共沉淀试验发现TgRON4L1,TgRON4与TgRON5有直接相互作用。为进一步探究TgRON4L1的功能,我们通过CRISPER/Cas9技术敲除弓形虫速殖子阶段的TgRON4L1基因,筛选获得单克隆虫株,发现缺失TgRON4L1不影响虫体入侵及逸出宿主细胞和宿主细胞内复制的能力,而在TgRON4缺失虫株中,TgRON4L1的表达量却明显上调。以上结果说明弓形虫棒状体颈部蛋白TgRON4L1是弓形虫移动联接复合物上的成员,并且其在功能上与TgRON4有着一定的补偿作用。