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目的探究可溶性晚期糖基化终末产物(soluble receptor for advanced glycation end products,sRAGE)与细胞因子之间的相互关系,初步确定sRAGE在矽肺纤维化进程中的可能作用;构建TGF-β1诱导的上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)细胞模型,明确与晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)结合共同参与调节矽肺发病的关键配体,探讨RAGE介导的矽肺纤维化中可能的作用机理。方法选取58例在中国煤矿工人北戴河疗养院内已经确诊的男性矽肺患者(主要在煤矿环境下做开采、粉碎、打磨等尘灰较多的工作者),其中,矽肺壹期12例,矽肺贰期17例,矽肺叁期29例。此外,选取13例正常身体健康的成年男性作为对照组。应用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent,ELISA)试剂盒检测人血清中sRAGE、TNF-α、TGF-β1、IL-6及IL-1β水平,同时收集研究对象的年龄、工龄、血压、体重指数(Body Mass Index,BMI)、首次接尘年龄、肺功能等基础资料。采用Pearson积矩相关分析sRAGE与TNF-α、TGF-β1、IL-6及IL-1β水平的相关性。常规条件下培养肺泡II型上皮细胞(alveolar type II epithelial cells,ATII),将人肺泡II型上皮细胞(A549)和大鼠肺泡II型上皮细胞(RLE-6TN)均随机分为对照组、5ng/ml TGF-β1刺激组、10ng/ml TGF-β1刺激组,分别培养48、72h,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EMT标记物表达情况。实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测TGF-β1刺激48h后EMT相关标记物的mRNA表达水平。EMT模型建好后,Western blot和qRT-PCR检测RAGE表达情况,同时检测RAGE相关配体S100A4、HMGB1的表达情况。确定RAGE伴随EMT发生的TGF-β1刺激最佳浓度和时间后,给予RLE-6TN细胞晚期糖基化终末产物受体抑制剂(FPS-ZM1),细胞分为以下5ng/ml TGF-β1刺激组六组:对照组、TGF-β1刺激组、TGF-β1+1μg/ml FPS-ZM1组、TGF-β1+5μg/ml FPS-ZM1组、TGF-β1+10μg/ml FPS-ZM1组、10μg/ml FPS-ZM1组,采用Western blot检测EMT相关标记物、RAGE和RAGE下游信号通路β-catenin的蛋白表达情况。结果1矽肺壹期和矽肺贰期组sRAGE表达水平显著低于对照组(均P<0.05);矽肺壹期和矽肺贰期TNF-α表达水平明显高于对照组(均P<0.05);矽肺贰期和矽肺叁期组TGF-β1的表达水平高于对照组(均P<0.05);矽肺贰期组和矽肺叁期IL-6表达水平高于对照组,且矽肺贰期组IL-6表达水平低于矽肺壹期组(均P<0.05);矽肺壹期IL-1β表达水平高于对照组和矽肺叁期组(均P<0.05)。2相关性分析结果显示,sRAGE的水平与TNF-α、IL-6和IL-β1呈负相关,相关系数分别为-0.241、-0.288和-0.413(均P<0.05)。3 TGF-β1刺激A549细胞48小时后,5ng/ml TGF-β1和10ng/ml TGF-β1组上皮标志物CDH1蛋白和mRNA水平均明显低于对照组,间质标志物CDH2蛋白表达明显高于对照组(均P<0.05);5ng/ml TGF-β1组和10ng/ml TGF-β1组RAGE、HMGB1、S100A4蛋白表达水平均明显高于对照组(均P<0.05);5ng/ml TGF-β1组HMGB1和S100A4的mRNA水平高于对照组(均P<0.05)。4 TGF-β1诱导RLE-6TN细胞48小时后,5ng/ml TGF-β1组上皮标志物ZO-1蛋白表达和CDH1的mRNA表达明显低于对照组,CDH2蛋白和mRNA表达水平以及α-SMA的mRNA表达水平均明显高于对照组(均P<0.05);5ng/ml TGF-β1组RAGE、HMGB1、S100A4蛋白和mRNA表达水平均增加。TGF-β1诱导细胞72小时后10ng/ml TGF-β1组ZO-1蛋白表达明显低于对照组,CDH2蛋白表达水平明显高于对照组(均P<0.05)。TGF-β1诱导细胞5FPS-ZM1抑制RLE-6TN细胞RAGE表达发现:TGF-β1+1μg/ml FPS-ZM1组、TGF-β1+5μg/ml FPS-ZM1组、TGF-β1+10μg/ml FPS-ZM1组与EMT模型组相比ZO-1表达均增加(均P<0.05),Vimentin和CDH2与EMT模型组相比表达均降低(均P<0.05)。与对照组相比,5ng/ml TGF-β1组β-catenin表达随RAGE增加而增加;与模型组相比,TGF-β1+1μg/ml FPS-ZM1、TGF-β1+10μg/ml FPS-ZM1组β-catenin均随着RAGE蛋白表达降低而降低(P<0.05)。结论1 sRAGE在矽肺病人血清中表达降低;sRAGE与TNF-α、IL-6和IL-β1的表达水平呈负相关,推测sRAGE可能通过影响细胞因子的表达调控矽肺纤维化的发生。2在TGF-β1诱导的肺泡上皮间质转化的细胞模型中,HMGB1/S100A4-RAGE通路活性增强。3抑制RAGE可以缓解TGF-β1诱导的EMT的发生,且RAGE可通过影响β-catenin信号通路参与调节TGF-β1诱导的EMT过程。图10幅;表15个;参122篇。