论文部分内容阅读
缺血性中风是由脑部主要动脉发生血栓性梗塞引起的复杂性疾病,现已成为导致死亡的主要因素之一。中药龙血竭常被用于血栓性疾病的治疗,尤其是在缺血性中风的预后方面具有良好的效果。其标准酚性提取物已被作为缺血性中风预后的临床用药,在中国范围内广泛使用。然而,由于中药具有多种分子和多种作用靶点特性,导致其潜在的作用机制研究具有较高复杂性,因此现阶段机制仍然不甚明确。本研究使用系统药理学分析方法,以龙血竭在缺血性中风的预后治疗为例,来解析潜在活性分子和分子机制。为缺血性卒中的预后用药提供了新的思路。采用系统药理学基本方法,开展了以下工作:(1)根据药物在体内的生物学过程ADME筛选出龙血竭的潜在活性分子;(2)使用系统药理学预测方法,得到龙血竭活性药效分子所能映射的对应靶标。运用Metascape数据库将所得的靶标聚类分析,并富集出靶标的生物学过程,结合TCMSP和CTD数据库获得靶标对应的与缺血性中风相关的疾病信息,并建立分子-靶标-疾病网络;(3)将龙血竭中活性分子能够映射的靶蛋白导入Metascape和DAVID数据库,富集出靶蛋白相关通路,并构建缺血性中风通路网络,在通路层面解析龙血竭治疗缺血性中风的分子机制;(4)细胞水平的药效验证:使用糖氧剥夺/再灌注(OGD/R)模型讨论了龙血素B对PC12细胞的保护,使用BV-2细胞的验证模型检测了4’,7-二羟基黄酮的炎症活性。结果表明:通过上述方法我们预测出龙血竭的38个药效分子,并通过直接或间接预测手段得到171个药效分子所能作用的靶标蛋白,基于靶标蛋白我们分析出其生物学过程,聚类分析得出有58种蛋白与缺血性中风疾病的发生和病理过程密切相关,且这58种蛋白靶标可以作用于61类中风相关疾病上。在通路层次分析得出;龙血竭可能是通过对抗缺血诱导的细胞死亡,增强细胞存活和对抗小胶质细胞激活介导的神经炎症反应,以及抗血小板活化、聚积和血压的调节来发挥治疗缺血性中风的预后治疗作用。本研究不仅解释了龙血竭在缺血性脑中风预后治疗中的深层分子机制,还发现了龙血素B可能通过激活PI3K/AKT/CREB或Nrf2途径,增加HO-1和Bcl-2的表达来保护PC12细胞免受OGD/R损伤的新途径,也为今后基于龙血竭及其提取物为原料的药物开发提供了重要参考。