2015版《中国药典》采用抗凝血酶活性评价水蛭的质量,在水蛭的质量评价中发挥了重要作用。水蛭作为一类生长、饮食环境特殊的动物类中药,其肠道菌群及活性代谢产物对水蛭质量具有重要影响,但水蛭的肠道微生物厌氧代谢产物的研究一直未受到关注。本研究聚焦水蛭肠道微生物菌群厌氧代谢产物,系统开展了不同来源水蛭中短链脂肪酸及其它代谢产物的研究,并应用于中药注射液疏血通注射液的质量评价中。1、采用TCMSP、Gene Cards、DAVID等公共数据库,检索水蛭中乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸7种化学成分与抗凝血、抗血栓、脑神经保护功能相关的作用靶点。对关键靶点构建PPI蛋白质相互作用网络,并进行GO功能和KEGG通路富集分析,探究短链脂肪酸抗凝血、抗血栓、脑神经保护的潜在作用通路。分析结果表明:在抗凝血、抗血栓作用中,与短链脂肪酸直接或间接相关的作用靶点有37个,主要涉及细胞调控、花生四烯酸代谢、叶酸生物合成、凝血系统、脂质代谢等8条生物通路;在脑神经保护作用中,获得关键作用靶点145个,主要包括细胞粘附、生长、增殖,神经细胞发育和再生、神经元信号传递等生物功能,涉及氨基酸合成、糖脂氨基酸代谢、磷酸戊糖和叶酸的合成等19条生物信息通路。2、采用气相色谱法(GC)构建水蛭中七种短链脂肪酸(SCFAs)(乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、异丁酸、异戊酸)的含量测定方法。测定20批不同来源水蛭中的短链脂肪酸含量,短链脂肪酸总含量1101-8571μg/g,乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、异丁酸、异戊酸含量差异悬殊;进一步研究了短链脂肪酸在水蛭中不同部位(体壁与内脏)的分布情况,单位重量内脏中的短链脂肪酸含量明显高于体壁中的成分含量;新鲜水蛭在晾干过程中由于肠道微生物的代谢,短链脂肪酸(乙酸、丙酸、异丁酸、异戊酸)含量明显增加,在滑石粉炮制过程中由于受热导致短链脂肪酸(除乙酸外)挥发其含量下降,乙酸含量有所上升。3、采用超高效液相色谱(UPLC)开展了水蛭中其它代谢产物的指纹图谱研究,以11号色谱峰为参照峰,建立了含20个色谱峰的指纹图谱。通过比较不同来源的水蛭中指纹图谱,发现不同来源水蛭中指纹图谱差异明显,其中光润金线蛭中化合物丰度明显高于其他品种的水蛭。通过制水蛭与生水蛭的指纹图谱比较发现,水蛭经炮制后化合物种类及其相对含量发生明显变化,部分化合物相对含量升高,部分化合物相对含量降低,究其原因可能是不同化合物在炮制过程中热稳定性差异引起的。4、聚焦以水蛭、地龙为原料的中药注射液疏血通注射液,采用气相色谱法(GC-FID)构建疏血通注射液中短链脂肪酸的含量测定方法。通过对36批疏血通注射液中短链脂肪酸含量的测定,发现疏血通注射液中乙酸、丙酸、丁酸含量分别为382.2-544.6μg/支、90.92-217.5μg/支、39.74-64.27μg/支(2 m L/支),不同批次的疏血通注射液乙酸、丙酸、丁酸含量有一定波动;总含量为545.79-815.83μg/支,波动较小。通过对水蛭、地龙中的短链脂肪酸分析,两味药材中均含有短链脂肪酸。通过本课题研究,构建了水蛭中肠道微生物厌氧代谢产物的分析方法并应用于疏血通注射液研究中,该研究对水蛭及其中成药的质量控制研究进行了新的探索,对阐明不同来源水蛭的质量差异、加工过程对水蛭质量的影响、水蛭不同部位的成分分布规律具有重要意义。