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目的:为了利用酵母菌有效防治哈密瓜细菌性果斑病,本文通过对酵母菌产酸条件、定殖条件及发酵粗提液对哈密瓜细菌性果斑病菌抑制作用机理的研究,以期探究酵母菌产酸、定殖特性和抑菌机制,为该菌株的开发应用提供参考。 方法:通过响应面法优化Pichia anomala 0732-1抑菌发酵条件,采用平板菌落计数法研究P. anomala 0732-1在哈密瓜叶片表面的定殖能力及产酸条件的研究,通过分光光度测定法研究P. anomala 0732-1发酵粗提液对燕麦嗜酸菌西瓜亚种( Acidovorax avenae subsp. citrulli,Aac)细胞壁、细胞膜和相关保卫酶的影响。 结果:溶氧量对P. anomala 0732-1的发酵有很大的影响。静止培养下由于溶氧量小,发酵液pH下降慢,最低为3.7。利用响应面法优化P. anomala 0732-1产酸发酵条件,得到最佳发酵条件,抑菌圈直径为17.9 mm与预测值接近。随着不同药剂和发酵液处理时间的增加,哈密瓜种子发芽率降低。P. anomala 0732-1菌悬液浓度为高浓度时(108 cfu/mL),其定殖及产酸效果越好;温度为28℃时P. anomala 0732-1定殖、产酸效果较好;高湿度(90%)条件有利于P. anomala 0732-1的定殖及产酸。P. anomala 0732-1在叶片表面的定殖及产酸能力受病原菌Acidovorax citrulli(Aac)接种顺序影响较大,接种病原菌Aac降低了P. anomala 0732-1在叶片表面的定殖产酸能力。先接种P. anomala 0732-1,24 h后再接种病原菌Aac对酵母菌定殖及产酸影响较小。发酵粗提液处理对Aac细胞壁有一定的影响;发酵液粗提液处理使Aac菌液中与细胞膜有关的代谢酶活力有所升高,但Aac细胞膜并未完全丧失选择通透性;发酵液粗提液处理使Aac菌体细胞中POD、SOD、CAT的活力整体呈现下降的趋势。 结论:溶氧量前期随着P. anomala 0732-1产酸下降而出现波动。利用响应面法得到P. anomala 0732-1产酸抑菌的最佳发酵条件。高浓度的菌悬液(108 cfu/mL)和高温(28℃)高湿(90%)有利于P. anomala 0732-1的定殖及产酸。接种病原菌Aac会降低P. anomala 0732-1在叶片表面的定殖产酸能力。经过P. anomala 0732-1发酵粗提液处理后,Aac菌体中的POD、SOD、CAT的酶活力呈下降趋势,这可能造成Aac菌体生长繁殖能力丧失而导致致病力下降,从而达到抑菌效果。