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背景和目的: 蚊虫(Culicidae)是虫媒病(Arbo-disease)的重要媒介,全球已知蚊种有3500余种,蚊虫传播疾病具有蚊种特异性,不同的蚊种传播的疾病不同,同一蚊种也可以传播多种疾病,同种疾病也可由几种蚊种为传播媒介,如:按蚊可以传播人类疟疾(如冈比亚按蚊Anopheles gambiae),埃及伊蚊(Aedes aegypti)和白纹伊蚊(Aedes albopictus)传播黄热病和登革热等。 骚扰阿蚊(Armigeres subalbatus)是与人类居住环境关系密切的蚊虫,目前已知,它可以传播淋巴丝虫病,犬恶丝虫病,日本脑炎,西尼罗热等疾病。广东省地处亚热带,一直是蚊媒病的重要流行区,温暖、潮湿的气候为蚊子的生存提供了良好的环境,蚊虫越冬时间短,甚至无需越冬,蚊媒性疾病流行和威胁依然不能忽视。 吸血昆虫的唾液腺蛋白在传播虫媒病的过程中发挥重要作用,是目前医学研究中的一项重要课题。本研究从免疫细胞的角度,观察唾液腺蛋白对宿主免疫系统的影响,分别从唾液腺蛋白对宿主免疫细胞的负向调节作用,唾液腺蛋白对宿主免疫细胞凋亡的影响,探究骚扰阿蚊传播疾病的机制。 方法: 1.野外采集骚扰阿蚊的四龄幼虫和蛹,在实验室饲养至成蚊。 2.分别用不同浓度的骚扰阿蚊雌、雄成蚊唾液腺蛋白连同干扰素刺激小鼠腹腔液细胞,用RT-PCR检测细胞因子CXCL10,STAT1,iNOS, IFN-β, TNF-α的表达情况,用Griess Test检测一氧化氮(NO)的产生情况。 3.用雌性骚扰阿蚊唾液腺蛋白刺激小鼠的腹腔液细胞、脾淋巴细胞,人的外周血单核细胞(PBMC),RAW264.7,THP-1,用 Annexin-V检测骚扰阿蚊唾液腺蛋白对免疫细胞凋亡情况的影响, 4.分别用荧光显微镜检测caspase-3的表达情况,用流式细胞仪检测Fas,caspase-8, p38 MAPK,JNK在唾液腺蛋白诱导的免疫细胞凋亡中的作用。 结果: 1:经雌性骚扰阿蚊唾液腺蛋白预处理的小鼠腹腔液细胞中CXCL10,STAT1,iNOS, IFN-β,TNF-α的表达较单独IFN-γ处理组显著下降;雄性唾液腺蛋白预处理的与阴性对照组没有区别。 2:雌性骚扰阿蚊唾液腺蛋白可以诱导小鼠腹腔液细胞,小鼠的脾淋巴细胞,人的外周血单核细胞(PBMC),细胞株RAW264.7,THP-1发生凋亡;雄性骚扰阿蚊唾液腺蛋白未诱导宿主免疫细胞发生凋亡。 3:雌性骚扰阿蚊唾液腺蛋白诱导Fas受体表达上调,但未激活caspase-8,p38抑制剂可以抑制骚扰阿蚊唾液腺蛋白诱导的小鼠腹腔液细胞凋亡。 结论: 1:雌性骚扰阿蚊唾液腺蛋白诱导免疫细胞凋亡,但没有严格的宿主和免疫细胞的特异性。 2:骚扰阿蚊传播疾病的机制,在一定程度上依赖于雌蚊唾液腺蛋白诱导免疫细胞凋亡,干扰宿主的免疫反应。 3:Fas受体,caspase-3, caspase-8,p38 MAPK参与雌性骚扰阿蚊唾液腺蛋白诱导的凋亡,此机制对虫媒病的预防与治疗有一定的指导意义。