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中国是茶叶的故乡,福建是中国主要产茶区。茶树病虫害种类繁多、发生危害大,各种茶叶病虫害不仅造成茶叶减产、品质下降。若茶园不合理用药,还会导致农药残留超标,污染环境,影响消费者健康,也严重阻碍茶叶出口。实施病虫害综合治理是发展无公害茶叶生产,确保茶叶优质、高产和可持续发展的重要环节。微生物农药由于其高效安全无残留不污染等特点,成为当今研究热点。
本研究利用实验室从厦门地区茶园病害分离得到的多种常见病原真菌作指示菌,筛选出两株具有抗茶叶致病真菌活性的深海来源菌株,经过鉴定一株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B5,一株为真菌淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)A65。通过平板对峙试验探究了两株菌对茶叶常见致病菌的抑制作用,防治效果均达到70%左右,具有较高制备成生防菌剂的潜力。
为获得大量菌剂有效成分,对两株菌进行了发酵培养基的筛选以及发酵条件的优化。通过单因子法与正交设计法相结合得到B5最合适发酵培养基配方为:可溶性淀粉5 g/L、酵母膏10 g/L、K2HPO410mM/L、NaNO35g/L,发酵所得到的发酵液中最大含菌量为3.12×109/mL。类似的方法得到A65的最佳发酵培养基是马铃薯蛋白胨可溶性淀粉(PPS)培养基:新鲜土豆200g,水煮30min后,纱布过滤,滤液中加入5g/L蛋白胨,20g/L可溶性淀粉,0.5g/L Ca(NO3)2·4H2O,0.2g/L Na2HPO4·12H2O,发酵液中含孢量达到1.86×109/mL。进一步优化两株菌的摇瓶发酵工艺,B5适合接种1%的种子液、中性偏酸的发酵pH、培养温度37℃、摇床转速200r/min、装液量为250mL中装100mL。A65则适合接种3个菌块,中性pH、培养温度28℃、摇床转速180r/min、装液量为500mL中装200mL。
确定了两株生防菌的可湿性粉剂配方,生防菌B5的可湿性粉剂配方为:Morwet EFW5%,Morwet D-4253%,羧甲基纤维素钠0.5%,荧光素钠0.3%,母粉补足100%; A65可湿性粉剂配方为:A65高孢粉10%,PEG60003%,木质素磺酸钠7%,CaCO31%,腐植酸0.5%,硅藻土补足100%。经过质量检测,两株生防菌可湿性粉剂的各项主要指标均达到或超过国家标准,满足工业生产质量要求。