肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,H.hepaticus)是一种能够感染小鼠胃肠道和肝胆系统的病原菌,可导致小鼠发生慢性肝炎与结肠炎。肝螺杆菌主要通过粪口途径传播,定植于小鼠盲肠与结肠,感染肠上皮细胞导致炎症。感染肝螺杆菌的免疫缺陷小鼠常被用作研究炎症性肠病的动物模型。炎症性肠病是一类广泛的肠道疾病,使用肝螺杆菌感染小鼠引起的结肠炎模型对于研究炎症性肠病具有重要意义。CdtB是肝螺杆菌的主要毒力因子,能够阻断细胞周期并促进炎症,因此,本研究旨在构建CdtB基因缺失肝螺杆菌菌株,并研究CdtB在肝螺杆菌引起肠炎中的作用机制。以肝螺杆菌为模板,扩增CdtB上、下游同源臂,其中插入氯霉素抗性基因,以氯霉素作为筛选用抗生素,构建pcDNA-△CdtB同源重组质粒,鉴定正确的pcDNA-△CdtB质粒电转于肝螺杆菌感受态细胞,经过4-5轮传代,通过PCR和测序对缺失株同源重组结果进行验证,鉴定正确的菌株与野生型肝螺杆菌进行细菌形态、生长曲线、生化特性、抗逆性、生物被膜等方面的比较。结果表明,两组菌株均呈薄膜状生长,生长速率无显著差异,CdtB的缺失未影响肝螺杆菌的生物学特性。使用野生型肝螺杆菌(WT H.hepaticus)和CdtB缺失株(H.hepaticus △CdtB)感染6周龄B6.129P2-IL10tmmlCgn/J小鼠,于12 w和18 w将小鼠安乐死进行采样,量取结肠长度,固定近端、中段、远端的结肠组织,-70℃保存剩余样本,HE染色后镜检WT H.hepaticus和H.hepaticus △CdtB菌株引起的小鼠结肠炎病理变化,进行病理评分。根据病理评分提取近端结肠RNA,使用qRT-PCR检测细胞因子表达;提取近端结肠蛋白通过ELISA检测IL-6蛋白含量、NO含量;western blot检测JAK/STAT信号通路相关蛋白表达。GraphPad Prism 8分析各组相关指标、细胞因子及蛋白表达水平的差异。结果表明:与CdtB缺失株相比,野生型肝螺杆菌感染小鼠18 w造成更严重的临床表现与病理变化,小鼠体重增长减缓,伴有脱肛,粪便稀疏的症状,同时结肠长度缩短;镜检发现结肠上皮损伤,伴有炎性细胞浸润。CdtB未影响肝螺杆菌的定植效率,造成的病理变化与细菌数量无关。CdtB能够上调结肠IL-1β、TNF-α、IL-6、iNOS的转录水平,同时增加了 IL-6的蛋白表达量。此外,CdtB使Jak2和Stat3蛋白磷酸化,激活了 IL-6/Jak2/Stat3信号通路。综上,数据表明,CdtB促进了结肠炎炎症的进展,通过激活IL-6/Jak2/Stat3信号通路增强了肝螺杆菌致炎能力,对肝螺杆菌致病具有重要作用。