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目的:通过观察理气清热活血方(以下简称W)及其三个拆方理气方(以下简称L),清热方(以下简称Q),活血方(以下简称H)对人甲状腺癌细胞SW579增殖抑制和TSHR-PLC-β-PKC-α信号转导通路的影响,研究理气、清热、活血三法治疗甲状腺癌的机理,探讨气滞、热毒与瘀血与甲状腺癌病变和TSHR-PLC-β-PKC-α信号转导的关系。 方法:采用人甲状腺癌细胞SW579为实验对象,显微镜下观察细胞的生长情况,计算出细胞抑制率,进而筛选出有效的药物;用正交设计选出疗效最好的方剂;用对照组和理气清热活血方及其三个拆方处理细胞,显微镜下观察SW579细胞生长状态及形态改变,用Western blot检测各治法组对SW579细胞TSHR-PLC-β-PKC-α信号转导通路中各蛋白表达的影响。 结果:1.理气清热活血方及其三个拆方对SW579细胞增殖明显抑制,对细胞形态作用明显不同,理气组细胞可见细胞表面粗糙,细胞内充满大量颗粒状或空泡样物质,皿中有少量细胞碎片。活血组可见细胞形态皱缩,透光度减低,形态不规则,贴壁性变差,细胞碎片增多。清热组细胞可见细胞疏松膨胀,细胞变成圆球形,细胞间隙变大,胞质粗糙,可见有较多的细胞碎片。全方组细胞表面粗糙,多数细胞呈空泡样结构,有大量的细胞碎片。2.理气清热活血方及其拆方均能抑制SW579细胞生长,全方抑制作用最强,抑制率随药物浓度、时间的增加而上升,对细胞生长抑制呈现剂量—效应和时间—效应依赖关系。3.人甲状腺癌SW579细胞可检测到TSHR、PLC-β、PKC-α蛋白分子的超量表达。4.用IC50药物浓度处理细胞时,理气清热活血方及其拆方均能调节TSHR-PLC-β-PKC-α信号通路各个蛋白表达水平。 结论:1.理气清热活血方及其三个拆方对人甲状腺癌细胞SW579的生长均有抑制,全方组效果最好,理气、清热、活血三法具有协同效应。2.理气清热活血方及其拆方均能降低SW579细胞TSHR–PLC–β-PKC-α信号通路各蛋白表达的水平,理气清热活血方及其三个拆方抑制甲状腺癌细胞的增殖与抑制TSHR-PLC-β-PKC-α信号转导相关。3.甲状腺癌的发病和TSHR-PLC-β-PKC-α转导通路信号增强关系密切。4.通过药效反证,证实在甲状腺癌病变中,气滞、热毒、瘀血与TSHR–PLC-β-PKC-α信号表达和转导增强关系密切。