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[目的]绝经后骨质疏松症(PMOP)发病机制尚不清楚,有研究显示阿司匹林对治疗PMOP有确切疗效。本研究通过临床对比研究,以分离培养的骨质疏松患者及正常人原代骨髓间充质干细胞(BMSCs)为研究对象,探讨不同剂量阿司匹林对BMSCs成骨分化的影响,寻找阿司匹林干预成骨分化可能的分子机制,探究BMSCs自噬的改变与成骨分化的关系,进一步阐明阿司匹林治疗PMOP的分子机制,为临床上预防及治疗PMOP提供新的理论依据。[方法]1.本课题采用临床对比分析的实验研究方法,收集我院住院患者45例,根据纳入及排除标准,排外20例,共纳入了 10例骨密度正常及15例患有PMOP的研究对象,所有患者均进行了关节置换或髓内钉内固定手术治疗,术中收集股骨髓腔内红骨髓,分别经过密度梯度离心及贴壁法种植传代,经免疫荧光染色鉴定BMSCs纯度。2.在成骨诱导过程中加入不同剂量阿司匹林对BMSCs进行干预,采用碱性磷酸酶钙钴法染色和碱性磷酸酶测定、茜素红染色、MTT等方法检测成骨钙化情况及细胞增殖情况。3.根据不同剂量阿司匹林对BMSCs成骨分化的情况,对骨质疏松组的BMSCs选取诱导前和诱导后的空白对照组、阿司匹林最佳剂量组以及最高剂量组,分别提取细胞总RNA,进行普通转录组测序分析并比较差异基因。4.对诱导前和诱导后的空白对照组、阿司匹林最佳剂量组以及最高剂量组的细胞匀浆裂解,测定蛋白浓度后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳检测 EEA-1、LAMP1、Atg7、Beclin1、P62 和 LC-3B等自噬相关蛋白表达水平,探究阿司匹林对BMSCs成骨分化影响的分子机制。[结果]1.纳入研究的两组研究对象在年龄、骨折部位、受伤至手术天数和BMI值上均无显著差异(P>0.05)。在术中抽取两组研究对象的股骨红骨髓并进行分离培养所获得的BMSCs,通过免疫荧光染色表达细胞表面特异性分子CD105阳性和CD45阴性的细胞占细胞总数大于95%,能够满足后续实验要求。2.在BMSCs成骨诱导分化中,共设置了 8个不同剂量的阿司匹林对BMSCs进行干预,碱性磷酸酶钙钴法染色和碱性磷酸酶测定结果显示阿司匹林剂量位于25μM至75μM时BMSCs中的碱性磷酸酶含量较高,茜素红染色结果显示阿司匹林剂量在5μM至50μM对于成骨诱导生成的钙结晶较多,高剂量的阿司匹林则明显抑制成骨分化过程,而不同剂量阿司匹林对BMSCs增殖速率并无显著差异。3.在RNA-seq测序结果分析中,与0μM组相比,诱导前、50μM和1000μM的基因表达差异分别为4698个、248个和4069个,对各组间差异基因的GO富集主要集中在了生物调节、细胞质、蛋白质结合等通路,差异基因的KEGG富集主要集中在了 P13K-Akt信号通路、癌症途径、细胞因子-细胞因子受体互作和钙信号传导等通路。4.在蛋白电泳结果中,BMSCs在成骨诱导后自噬水平明显升高;在50μM阿司匹林的干预下,LAMP1(P=0.0019 vs 0μM)和Atg7(P=0.0074 vs 0μM)表达降低,LC3B-II/LC3B-I(P=0.9971 vs 0μM)表达无差异;而高剂量的阿司匹林对细胞自噬起到明显抑制的作用。[结论]1.低剂量的阿司匹林对PMOP患者成骨分化具有促进作用。2.高剂量阿司匹林对PMOP患者成骨分化具有明显抑制效应,并与细胞自噬抑制相关。3.不同剂量阿司匹林对BMSCs分化过程中的细胞增殖速率无影响。4.自噬水平升高参与了 BMSCs成骨分化过程,并伴随多种基因通路表达的改变。